Y190酵母感受態細胞

保存條件：-80℃。

1.產品簡介：

Y190是GAL4系統酵母雙雜實驗用菌株，MATa型，可直接轉化質?；蚺cMATa型酵母菌株Y187通過mating進行篩庫試驗。

Transformation marker為: trpl， leu2， cyh2， 報告基因為:lacZ，HIS3，MEL1。Y190-GAL4酵 母雙雜系統需要兩種質粒配套使用: (pGB和pACT2)或( pGBKT7和pGADT7)。質粒pGB由pGBKT7改造而來，篩選標志為TRP1，用于表達DNA-BD與目標蛋白的融合蛋白;質粒pACT2與pGADT7的結構和功能類似，篩選標志為LEU，用于表達AD與目標蛋白的融合蛋白。Y190感受態細胞經特殊工藝制作，pGADT7質粒檢測轉化效率>104 cfu/ μg DNA。

基因型：MATa，ura3- -52，his3- -200，ade2-101， lys2-801, trp1-901 ，leu2-3，112， gal4△，gal80△，cyhr2， LYS2 : GAL1UAS-HIS3TATA-HIS3，MEL1 URA3 : : GAL1UAS-GAL1TATA-lacZ

2.使用說明：

1).取一支無菌的1.5ml EP管，依次加入預冷的目的質粒1-3μg, .Carrier DNA 10μl(95-100℃ 5min快速冰浴，重復一次)，100μl冰上融化的感受態細胞，PEG/LiAc 500ul， 輕輕翻轉混勻6-8次;

2).30℃ 水浴30min，每10min輕輕翻轉混勻6-8次;

3).每支加入20ul的二甲基亞砜; (用于提高轉化效率，可不做)

4).42℃水浴15min，每5min輕輕翻轉混勻6- 8次;

5).12000rpm瞬時離心棄上清,每支加入1m1的YPD Plus于30℃復蘇1h; (用于提高轉化效率， 可不做)

6).12000rpm瞬時離心棄上清，用100ul 0.9% NaCl 重懸，涂板,30℃培養48 - 96h。

3.注意事項：

1).感受態細胞最好在冰上融化.

2).PEG溶液在低溫環境下會析出，請于常溫下完全溶解后使用。

*本試劑僅供實驗室研究使用