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組蛋白琥珀酰化（histone succinylation）作為新型表觀遺傳修飾，在基因表達調控、代謝信號傳導和疾病研究中具有重要意義。由于琥珀酰化修飾肽段通常豐度低、易受降解，其檢測對樣本前處理提出了高要求。前處理環節的優化直接決定 LC-MS/MS 或免疫檢測的準確性和靈敏度。

一、組蛋白琥珀酰化樣本前處理的重要性

1、保證修飾完整性

組蛋白賴氨酸上的琥珀酰基易受酸堿、溫度和酶活性影響而脫落。有效的樣本前處理可以保護修飾，確保檢測結果可靠。

2、提高檢測靈敏度

低豐度修飾肽段在復雜蛋白混合物中容易被掩蓋。通過前處理富集目標蛋白及肽段，可顯著提高 LC-MS/MS 或免疫檢測的信噪比。

3、減少干擾物質

細胞裂解液、核酸和鹽分等雜質會影響色譜分離和質譜信號。前處理可去除這些干擾，保證實驗的重復性和可比性。

二、組蛋白琥珀酰化樣本前處理的總體流程

組蛋白琥珀酰化前處理通常包括：細胞或組織裂解、組蛋白提取、蛋白定量、酶解與肽段凈化、肽段富集等關鍵環節。

1、樣品裂解

（1）選擇適宜緩沖液

常用高鹽緩沖液（如 0.4–0.5 M HCl 或 0.2–0.4 M NaCl）可有效提取核蛋白，同時減少組蛋白降解。酸性緩沖液有助于溶解組蛋白，但需控制處理時間，避免琥珀酰化脫落。

（2）加入抑制劑

為防止蛋白酶降解和去修飾酶活性，應添加蛋白酶抑制劑、去乙酰化酶抑制劑和去琥珀酰化酶抑制劑（如 nicotinamide、sirtuin 抑制劑）。

（3）保持低溫操作

全程 4°C 或冰上操作，最大程度保護組蛋白修飾穩定性。

2、組蛋白提取

（1）酸性提取法

使用 0.2-0.4 M H?SO? 或 HCl 提取組蛋白，隨后通過乙醇沉淀或超濾濃縮。此方法能夠高效富集 H1、H2A、H2B、H3、H4 等組蛋白亞型。

（2）鹽提取法

高鹽緩沖液可選擇性提取核蛋白，適用于結合后續酶解和質譜分析的實驗設計。

（3）去除雜質

通過多次離心或超濾去除 DNA、RNA 和小分子代謝物，減少后續色譜和質譜干擾。

3、蛋白定量與質量檢測

在進行酶解前，需準確測定蛋白濃度，保證酶解條件可控。常用方法包括 BCA 法和 Bradford 法。同時，可通過 SDS-PAGE 檢查組蛋白提取效果，確保各組蛋白亞型完整。

4、酶解與肽段制備

（1）酶選擇

胰蛋白酶（trypsin）常用于琥珀酰化肽段酶解，但由于組蛋白賴氨酸和精氨酸豐富，單獨胰蛋白酶可能產生過短肽段。可結合 Lys-C 或 Arg-C 聯合消化，提高肽段覆蓋率。

（2）保護修飾

酶解過程中，需添加抑制劑或調節 pH，以防止琥珀酰化脫落。

（3）肽段凈化

通過固相萃取（SPE）去除鹽分和小分子雜質，為 LC-MS/MS 檢測提供干凈樣品。

5、琥珀酰化肽段富集

（1）免疫親和富集

利用特異性琥珀酰化抗體捕獲肽段，可顯著提高低豐度修飾檢測靈敏度。

（2）化學富集策略

通過特異化學標記結合親和捕獲，可進一步提高肽段覆蓋度。

（3）多步富集

在復雜樣品中，多步富集策略可最大化琥珀酰化肽段回收，同時降低背景干擾。

三、組蛋白琥珀酰化樣本前處理環節的關鍵注意事項

1、溫度與時間控制

樣品裂解和提取需低溫操作，避免高溫導致修飾脫落。

2、pH 調節

酸性或堿性環境過強，易導致琥珀酰化水解或蛋白變性，需精確調節緩沖液濃度。

3、抑制酶活性

去琥珀酰化酶活性會導致修飾丟失，前處理全程加入抑制劑可有效保護琥珀酰化。

4、樣品一致性

多個樣本需統一處理流程，以保證數據可比性和重復性。

組蛋白琥珀酰化樣本前處理是高質量檢測的關鍵環節，直接影響 LC-MS/MS 或免疫檢測的靈敏度和可靠性。通過優化樣品裂解、組蛋白提取、肽段酶解與富集策略，科研人員可以獲得完整、穩定的琥珀酰化肽段，準確解析其分布和動態變化。百泰派克生物科技憑借成熟的前處理技術、專業質譜平臺和全流程服務，為科研團隊提供可靠的組蛋白琥珀酰化研究支持，助力基礎研究和應用探索，為精準表觀遺傳學和代謝相關疾病研究提供堅實保障。

百泰派克生物科技特色項目

一、蛋白測序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統對蛋白質序列進行分析，提供基于質譜的蛋白測序分析服務，包括對蛋白質的氨基酸組成分析，N端測序，C端測序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白質N端序列分析服務。對于未知理論序列的蛋白質，提供基于從頭測序法的蛋白質從頭測序服務，對蛋白序列進行分析。

※服務優勢：

1.采用目前世界上先進的質譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實現對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;

4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測;

6.測序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、蛋白質組學

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質譜平臺結合Nano-LC，提供定量蛋白質組學、靶向蛋白質組學、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種蛋白質組學分析服務。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白質組學服務，助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫學及高通量修飾組學等研究工作。

※服務優勢：

1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規模實驗分析，發現新的生物標記物;

2.體內體外多種蛋白質標記方法，適用于分析組織、細胞、血液等多種樣品;

3.質譜分析靈敏度高，實驗結果重復度高;

4.可檢測較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.專業生物信息學分析，分析更系統準確。

三、單細胞質譜流式技術分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質譜流式系統進行單細胞質譜流式技術分析，采用金屬元素標記物（通常是金屬元素標記的特異抗體）標記細胞表面和內部的分子，然后用流式細胞原理分離單個細胞，再用電感耦合等離子體質譜（ICP-MS）分析單個細胞的原子質量譜，最后將原子質量譜數據轉換為細胞表面和內部的信號分子表達量。

※服務優勢：

1.技術先進，填補技術空白

采用金屬標記抗體技術，避免了傳統流式熒光通道少且易相互影響的問題。可在單細胞層面上對多種指標同時進行表征，百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。

2.分析數量大，成本較低

單細胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細胞匯總的分析數目一般在2x10^4個左右，而流式質譜技術一次（單樣本）就可分析至少10^5的細胞，實現了數量級的提高，且成本不高于單細胞RNAseq。

3.應用前景大

①流式質譜結果可以給出細胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標簽技術與其他技術結合會有新應用方向。除常規蛋白外，質譜流式細胞技術還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現

百泰派克生物科技的基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析，可從最小的樣品材料中進行可重復的識別和定量。該服務可以應用于大規模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質譜技術，MALDI TOF，高效色譜分離技術，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從蛋白質、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結構分析，到產品變異性和純度分析。旨在提供優質生物藥物分析服務，幫助生物醫藥生產商提高生物藥物品質。

百泰派克生物科技七大檢測平臺

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質譜多組學優質服務商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫療器械行業提供質量控制檢測和項目驗證等專業服務。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規和指導原則，通過CNAS/ISO9001雙重質量體系認證，建立了完備的質量體系，數據冷熱/異地備份，設備定期計量/期間核查，軟件審計追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術服務，支持新藥研發、藥物申報注冊和生產放行。

1.公司采用ISO9001質量控制體系，專業提供以質譜為基礎的CRO檢測分析服務；

2.獲國家CNAS實驗室認可，為客戶提供符合全球藥政法規的藥物質量研究服務；

3.業務范圍覆蓋蛋白質組學、多肽組學、代謝組學、生物藥物表征、單細胞分析、單細胞質譜流式、生信云分析以及多組學生物質譜整合分析等；

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5.服務3000+企業，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優質的生物質譜分析服務!

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