20230905

臨床級別PBS原料已下線，進口包裝瓶，常年穩定供應，水級別應比注射級稍高。價格100元/1L保種建系推薦。統計理由闡述較繁瑣，大牌子該類產品，十幾年一分不降。

各地市銷冠，為配合優質長期完美銷售，細胞培養問題可來信告知討論細節（問題溝通需全部細節，試劑方法，老師技術背景經驗）POTOCOL提供參考討論可行性，平時問題積累與解決是提供優質試劑最好的案例。

細工方向是原代建系相關穩定體系試劑開發。

推薦：保種體系試劑
適合：正規庫來源細胞，協和庫，上海庫，武漢庫，ATCC來源
我司篩選細胞：乳腺癌類，肝癌類，卵巢癌類，原代，胰島胰腺類，免疫懸浮類，ATCC來源。
推薦用戶篩選細胞：raw264.7理由，內毒素不達標的血清，細胞分叉長角，后期又增無減，高質量血清培養細胞成圓形，細胞透亮，增殖正常。該株具體問題具體分析。溝通技術問題可來信告知，來信要求：原裝進口體系試劑耗材，細胞來源清晰，細胞培養詳細描述，問題詳細描述。因細胞培養影響因素眾多，環境，二氧化碳，試劑，手法等眾多因素，描述清楚后，我們會給出建議方案。
懸浮類：THP-1經典的免疫細胞，經幾年統計總結，這只細胞建議反復凍存復蘇后一代以上成功，才能說明試劑體系穩定，懸浮培養具體問題可來信溝通。
鼠類來源細胞一般對試劑要求較高。
以上問題溝通前提：進口試劑耗材，細胞來源清晰。國產試劑耗材暫不涉及統計。

國內細胞狀態統計一些小建議-血清
高質量的血清：應該是細胞出現問題能解決問題，并能持續保證質量一貫性。
與很多老師意見：其他細胞都能養活，就這個細胞養不好。正好相反，建議評審條件正好相反。如能長期關注這種問題，篩選出的血清質量結果也是最可靠的，就像我們出現問題能想到的那款血清，為啥這款血清能夠完成幾乎所有問題解決，幾十年質量一致性，批間差幾乎為零。這種血清才是高質量血清。
歡迎與常年從事細胞質量要求高的實驗室一起解決各種問題，目前技術、試劑、設計、方法已相對成熟。國內從從細胞建系開始的技術試驗已經非常成熟了，我司目前目前跟蹤統計的原代細胞建系思路設計及實驗已經有幾年了，真正的成熟還要做很多的工作。我司十年的基礎實踐統計，歡迎您的參與與提攜。

2019-目前血清分裝后污染問題多，統計方法分享
解決辦法，原瓶與分裝放四度兩個星期以上時間比較渾濁度，能說明是本身質量問題還是操作分裝問題引起的，糾紛不是目的，找到問題才是關鍵。
歡迎各位老師反饋意見建議。
祝商家生意興隆
祝老師實驗順利

20240607
種子庫試劑-維持培養意義
培養基、血清、耗材、手法
維持培養天數比較實驗，培養基、血清、耗材、手法
培養基
對比各種生產技術工藝中（球磨、錘磨、高速氣流粉碎、針磨）。穩定性，批間差、產能應用有非常積極意義，細工通過生產中各類問題統計解決，推薦種子庫級別試劑，國產體系備份用。
細胞系建系，從細胞源頭開始，到整個培養體系全部國產備份。長期各種問題統計中，統計內容全部共享驗證可行性。前面統計各種難養系，在后面類器官應用中已有些效果，為更好溝通重點并快速驗證效果，統一理念非常重要。
血清：通過問題解決篩選,如做細胞匯合實驗驗證，可討論普通血清與種子庫血清差別。培養中問題統計還比較全面，難養系，原代，類器官，PDX等難點痛點都有理論支撐及案例統計說明，培養理念一致的，如找不到廠家支持，文獻支持的，我們給些建議參考。
耗材：國產較多，廠家要能公布詳細參數，對產品提升質量有大意義。
技術手法：難養細胞特性特點，解決問題為主，成團成片、傳代后消化不下來等，要能整體看這類問題，還是能找到些共同特點，具體問題具體分析，可討論，細工給些參考建議。
凍存復蘇：堅持傳統DMSO方案，總結更優解決思路，對凍存復蘇挑剔細胞可詳細討論。
上述經典案例，可看下增強貼壁試劑介紹噬斑十日現案例圖片。
同行路過建議：純國內體系建系合作，我司負責問題統計，及解決思路方案完全共享，目的是為建系順利及反復多家同時驗證做些技術儲備，人才儲備，獸用疫苗應用建系可討論溝通，含血清細胞工廠應用容易些，建系成本可控，技術可控，人才長期儲備。

解離培養基
貨號：ECAK-004
規格：1ml
細胞類型：易團聚，易成片，貼壁細胞馴化成懸浮細胞含血清方案，原代細胞組織塊解離。
使用：100X 即用試劑
是否是腫瘤細胞：適用各類細胞

案例細胞：HEP G2易成團，后續影響細胞狀態，加入試劑后，解決成團問題后，細胞增殖培養狀態明顯有很大改觀。有興趣老師如準備這只細胞，建議來信告知血清等級。稍差血清對細胞的影響，不是解離培養基可解決的。

原代組織細胞：
組織離體后，建議最快手法入皿（建議四十分鐘內），讓解離培養基發揮作用，并及時得到完全培養基營養。成功率會更穩妥。組織消化過夜的方法的老師，建議可按我司推薦方法重復實驗。推薦我司Optimized Trypsin 產品替換：膠原酶、ACCUTASE等過夜消化產品。
若有感興趣老師，可來信標注：原代細胞解離關注，我司后續統計進展可定期發送。

20230323 懸浮培養皿應用解決肺，懸浮細胞（腺，神經）售后補充，常規量用法，效果不明顯，細胞狀態差，經查資料后，建議
懸浮皿建議問清楚廠家懸浮皿所用原理，營養成份拖起細胞使細胞團聚厲害，瓊脂與甲基纖維素方式，建議參考以下文獻，胰酶與膠原消化效果不理想，傳代需EDTA方法，加該試劑建議備量試下，
參考文獻
Chen G., Gulbranson D.R., Hou Z., Bolin J.M., Ruotti V., Probasco M.D., Smuga-Otto K., Howden S.E., Diol N.R., Propson N.E., Wagner R., Lee G.O., Antosiewicz-Bourget J., Teng J.M., Thomson J.A.(2011) Chemically defined conditions for human iPSC derivation and culture.Nat Methods 8(5):424–429.
關鍵詞：
Essential 8 Medium PSC StemFlex protocol somatic cell reprogramming of CD34+ blood cells
組織來源細胞系懸浮特性，易成球特點的（含腺 神經特點）
討論溝通：細胞、問題、操作前后詳細描述，目的需求。

20230326 細胞傳代需EDTA方法開始統計，歡迎各種提問，我們以含血清細胞工廠為基礎討論為主，無血清建議告知盡可能多的資料，大廠標準比較穩妥。國內研發生產盡量全部細節溝通（國外比較成熟的技術了），相關討論郵件聯系。附件是公開的potocol ,我們給出參考。也是基于國內常見問題統計給出的建議。

20240919

原代建系處理參考，建議無外力（化學力，機械力），冰上處理組織后，直接入瓶培養（皿與瓶差別很大，在增殖不順利問題統計，黑點，生長過慢，成瘤不穩定組幾個難點統計過程中，評價培養體系后，瓶培養可以1-4周后恢復到較好狀態（皿開放式空間太大，二天以上培養過程中，PH變化大，瓶可避免該類問題）無外力培養后，原代組織到細胞也可4-7天傳代（具體問題具體分析，超過這個時間的，建議上述做備份組或預實驗，含血清，上清回輸，組織必須因子等可討論方案）能夠順利生長后，在做后面建系準備（或上簡易單克隆法，也可反復單克隆，保證是目的細胞純凈，并STR驗證），在做病毒感染建系，建系后，可通過簡易單克隆法，反復篩選出成堆較快組，提升優化建系后增殖速度。
冗余理念試劑提出，通過難養細胞，難養類共性問題，開發出容錯性高，可執行性強，已有三年以上工業生產應用統計，目前在自動化轉染設備應用問題中拿到幾個關鍵性問題，試用效果理想。

細胞反向馴化，貼壁馴化成懸浮，懸浮馴化成貼壁，2017年增強貼壁試劑正式列裝后，就對該應用開始通過解決問題結合，成團成片成堆解決后，轉染效率提高，凍存復蘇活性提高。

冗余理念提出，都是為建系目的，解決痛點難點，為建系做充足技術儲備,為自動化培養，轉染等高通量實驗做，易行，積極準備，解決問題先行，可行后，大膽放心實行。
增強貼壁試劑
轉染試劑
優化胰酶
凍存復蘇優化推薦
解離培養基
簡易單克隆

自動化培養，轉染配套冗余試劑開發。

人造肉，類器官，外泌體：建系，干方案，精準SOP配套冗余試劑自動化。

20240926

冗余研發路徑，對國內常規培養體系了解并深刻理解，就是難點痛點都要試錯，通過試錯并統計找到可能解決問題的最優路徑。
經歷歷程：難養類細胞問題統計，黑點，生長慢，成瘤不穩定細胞問題統計，凍存復蘇細胞活率統計，難轉細胞特性，轉染試劑研發方向，簡易單克隆建系中優勢等，都是為國內建系做足技術儲備。
例如：
就轉染后死細胞過多，細工在培養基，血清方面做些技術儲備。
轉染后的細胞對培養基PH要求更高，我們生產專門對該項指標做嚴格控制，可做預實驗比較，如果能達到滿意預期效果，這個培養基在救助死細胞過程中起到關鍵作用，也為自動化應用提前做相關技術儲備。
該問題來源：二倍體系（WI-38，MRC-5,原代問題常年統計，工業應用中二倍體培養體系普通實驗室較難達標，常規系容錯能力很高，長期培養后，也會形成培養室自身特點。建議實驗室庫有純國產培養體系備份，并長期驗證。
血清：種子庫級別試劑，我們平時驗證對標國內正規庫來源細胞長期驗證，特別是較難養的（各類難養的乳腺，肝，胰島胰腺，免疫類系長期驗證），轉染后死細胞過多方法，建議按原指標血清用量提升5%，更多營養補充，救助轉染過程中損傷救助。
耗材：以上驗證盡量用進口耗材，難養系分類較多，各有各的特性細節都可討論溝通，建議給出原始細胞圖片，現細胞圖片，培養體系廠家，貨號。都會得到細工全套免費試用小包裝驗證。
就自動化培養，轉染，細工簡易單克隆方法可共享potocol,及后面問題可討論，討論前細胞生長特性，準確的目的需求要溝通。

20240930

解離兩個拓展案例參考

難轉染細胞系，免疫類，原代類，成團成片處理后，提高轉染效率，團，球體只有外面細胞接觸到轉染試劑，中間的細胞接觸不到，所以影響轉染效率，該問題在凍存前提前處理，配合膜無損優化胰酶，復蘇后也可提升細胞活率，這類細胞免疫類，腺類，神經類，膠質類，上皮類，SV40,成團成片都會有這類特點。原代類建系，細工配套要點宣傳，高滴度病毒生產，參考增強貼壁試劑案例介紹（原代建系中，也會用到該方法）

20241008

自動化應用配套-冗余試劑
解決實際問題，易重復，反復控制，更多非線性自動化發展冗余試劑容錯調整，細胞馴化培養等，簡易單克隆種子庫種子高精準篩選。
目前頭部公司已有，自動化培養，轉染、核酸（DNA，RNA）就我司執著后面建系目的開發痛點問題統計，也開發些冗余試劑細胞培養重點，該試劑特點是來自難養中問題統計，如培養中（黑點、生長慢）常見問題中都有些小成績，痛點問題給出參考技術儲備，后面也可選擇細工提供統一案例驗證細胞，試劑，技術手法，還可通過問題實戰解決評價，預期效果展現，比較說明可行性。
我們只做科研階段討論，中式涉及的問題我們也有興趣統計，理論上我們案例細胞思路就是配套自動化目的，案例細胞容錯能力來自問題統計與應用，適合二倍體工業應用自動化理論上已討論通過，幾個小品列下優勢及特點，胰酶、增強貼壁試劑，轉染試劑。
胰酶：對細胞膜無損，各種胰酶敏感細胞常規培養，種子庫驗證案例多，293每個實驗室都用，我們胰酶可同時加幾十盤同時處理，細胞工廠工業案例培養面積廣，都可隨手驗證，因培養涉及因素較多，進口國產體系，預算影響等其他因素需建議意見的，我們也可提供參考建議。
增強貼壁試劑：救助凍存后復蘇不活案例已開始統計，7年統計中，救助案例還比較少，預計后面這種問題可能會更多，（新品化學成分對細胞的影響，后面有可能會統計）蛋白增產，超長維持培養是這款產品特點，后面具體問題具體分析討論，產品鏈接介紹了我們產品案例歷程。
轉染試劑：結合自動化應用，毒性小，反復轉染十幾次，反復控制，對難點問題有明顯機器優勢，難轉的痛點問題大質粒，可設計幾個小質粒同時反復轉染，也是給這種大質粒解決問題的一個思路。

優勢簡述
細工優勢在自動化細胞培養中，冗余試劑為重點方向，維持培養有明顯優勢，封閉系統減少污染，高通量易重復，常規問題能解決，痛點問題有突破。統計問題一直做，
自動化相關，DNA,RNA可來信注明您司優勢，需案例細胞驗證郵件注明。國內試劑研發生產，建議參與建系合作，優勢是自己體系的細胞系很能說明試劑水準，細胞工廠結合含血清自動化，目前優勢大。容易實現，痛點問題都可先討論及驗證。
以減少手動處理引起的變化，并在高通量分析中獲得可重復的結果。高通量應用，如敲除研究或靶篩查，通常包括細胞轉染。
建系中：無外力影響，含血清培養優勢可行性高，無血清開發成本高，先不參與，培養中問題還是積極統計，沒有問題就沒有研發。血液類細胞低速離心篩選統計開始。
二倍體工業應用：純國產體系備份，產品，技術，增強貼壁試劑統計歷程，難點痛點各種問題都有涉及，各種難養系技術統計儲備，可做靈活穿插及長期驗證
一次性大容量轉瓶為大規模細胞培養，我司促貼壁微球案例圖，是靜止培養后貼壁細胞，需優化可標明細節先討論可行性。(微載體/轉瓶/搖瓶/滾瓶）

封閉系統解決優勢一次性技術自動化應用。
生物生產/細胞培養/細胞生長/干細胞研究/細胞生產/疫苗開發-維持培養優勢
藥物發現/3D細胞培養/癌癥研究/基因組學/蛋白質晶體學/蛋白互作用/疫苗研發-細工結合建系，單克隆種子庫，含血清細胞工廠結合自動化，高通量，封閉系統
化學/有機化學

相關應用

工業案例統計-工業
生產痛點是可擴展性、自動化、模塊化類型靈活性，以及所有這些因素如何影響上市時間和生產成本
蛋白質到抗體再到核酸生產，產品成功實現生物反應器接種和大規模懸浮培養
生物分子大規模生產
凍存可以使細胞進入真正的懸浮休眠狀態，最大限度減緩細胞衰老和進化，從而為生物庫研究應用提供更均勻的細胞群。
病毒載體在基因和細胞治療中的應用在各種疾病中研究，質量控制過程中對基因治療產品進行質量和安全控制的需要，以確保其進入臨床試驗階段
疫苗研發行業工作，成為動物健康領域細菌和病毒疫苗的生物工藝科學家，負責擴大規模，并與制造工廠進行技術轉讓。
行業痛點最關心的一些是可擴展性、自動化、模塊類型靈活性，以及所有這些因素如何影響上市時間和生產成本。
單獨控制細胞內的混合體積，病毒載體在基因和細胞治療中的應用在各種疾病中研究，質量控制過程中對基因治療產品進行質量和安全控制的需要，

細工免疫細胞建系，科研
造血單核細胞（PBMC）、CD8+細胞。CD3+細胞，抗生物素藥物輔助，逆轉錄病毒的生物素來選擇CD8+細胞
分離單核細胞，低速離心方法統計開始，無外力（機械力，化學力），含血清建系，轉染感染建系痛點討論，
CD3+細胞的方案符合生物素抗淋巴瘤
大規模擴增干細胞/MSC/pbmc/MSCs/間充質干細胞的長期培養，生物素化抗體偶聯物篩選
測量微升液滴溶液中納米顆粒（NP）的尺寸和濃度
血液制品中分離和收獲可編程體積的靶細胞群?？啥ㄖ频倪^程編程、將樣品自動分離到三個腔室中以及用于細胞分離的高靈敏度紅外傳感器可確保一致、可靠、高效、高回收率的結果。
從蛋白質到抗體再到核酸生產，利用細工生物冗余試劑工藝和細胞培養產品成功實現生物反應器接種和大規模懸浮培養或貼壁細胞工廠培養。
如衰老、癌癥、傳染病等。

20241105

類器官，售后統計應用參考與討論

無血清方案成團成片消化參考：用戶懸浮培養無血清培養體系，消化備份方案參考（無動物源成份要求）
1：EDTA單獨消化
2：培養過程中解離培養基
3：無酶消化液。
后面具體問題具體分析，就無酶消化后，細胞呈糨糊狀分析，是無血清方案后培養特性，細胞緩沖能力弱，一是營養耗盡后，細胞馬上呈現弱化現象，避免應考慮提前換液，無血清大部分廠家還是研發為主，替代血清還有待提高。無酶理論上對細胞損傷很小，結合無血清，要考慮細胞緩沖能力。

就以上問題，細工方案，先含血清大量培養后，在上無血清會好很多，充足細胞量是摸無血清條件不錯的方案，細胞凍存復蘇也涉及研發過程較重要環節，可就具體案例細胞討論，種子庫、工業應用，臨床樣本研究，對凍存復蘇挑剔各類問題匯總統計中。