Annexin V-PE/7-AAD凋亡檢測試劑盒
產品名稱： Annexin V-PE/7-AAD凋亡檢測試劑盒
英文名稱： Annexin V-PE/7-AAD Apoptosis Detection Kit
產品編號： C331407
產品價格： 480
產品產地： 美國
品牌商標： Arcegen
更新時間： 2025-10-20T09:25:48
使用范圍： null
| 規格 | 價格 |
| 20T | 480.0 |
| 50T | 960.0 |
| 100T | 1680.0 |
- 聯系人 : 孟醒
- 地址 : 申江南路4388號1幢2層208室
- 郵編 : 201314
- 所在區域 : 上海
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- 郵箱 : cmeng@magibagbio.com
產品簡介
Annexin V-PE/7-AAD細胞凋亡檢測試劑盒是用紅色熒光染料PE（Phycoerythrin）標記的Annexin V作為探針，來檢測細胞早期凋亡的發生，可用熒光顯微鏡、流式細胞儀或其他熒光檢測設備進行檢測。
檢測原理：在正常的活細胞中，磷脂酰絲氨酸（phosphotidylserine，PS）位于細胞膜的內側，但在早期凋亡的細胞中，PS 從細胞膜的內側翻轉到細胞膜的表面，暴露在細胞外環境中。Annexin-Ⅴ（膜聯蛋白-V）是一種分子量為35-36KD的Ca2+ 依賴性磷脂結合蛋白，能與PS高親和力結合。可通過細胞外側暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細胞的胞膜結合。7-AAD是一種核酸染料，同PI有著相似的熒光特性，但其發射光譜較PI窄，對其他檢測通道的干擾更小，在多色熒光分析中是PI的最佳替代品，可與Annexin V聯合使用。該染料不能透過正常細胞或早期凋亡細胞的完整的細胞膜，但可穿透晚期凋亡細胞或者壞死細胞并與其內的DNA結合。因此將Annexin V-PE與7-AAD聯合使用時，7-AAD則被排除在活細胞（Annexin V-/7-AAD-）和早期凋亡細胞（Annexin V+/7-AAD-）之外，而晚期凋亡細胞和壞死細胞同時被Annexin V-PE和7-AAD結合染色呈現雙陽性（Annexin V+/7-AAD+）。
產品規格
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貨號 |
C331407E/C331407S/C331407M |
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規格 |
20 T/50 T/100 T |
組分信息
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組分編號 |
組分名稱 |
C331407E |
C331407S |
C331407M |
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C331407-A |
重組人Annexin V/PE*（rh Annexin V/PE） |
100 μL |
250 μL |
500 μL |
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C331407-B |
7-AAD Viability Staining Solution（20 µg/mL） |
200 μL |
500 μL |
1 mL |
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C331407-C |
4×Binding Buffer |
4 mL |
10 mL |
20 mL |
*來源于大腸桿菌（E.coli），分子量為35.8 KDa，純度＞98%（SDS-PAGE & HPLC）
儲存條件
冰袋（wet ice）運輸。本試劑盒中所有組分均在4 ℃保存，勿冰凍。Annexin V-PE、7-AAD需避光保存。一年有效。
注意事項
- 由于細胞凋亡是一個快速的過程，建議樣品在染色后1小時之內進行分析。
- 貼壁細胞的消化是一個關鍵步驟。貼壁細胞誘導細胞凋亡時如有漂浮細胞，需收集漂浮細胞和貼壁細胞后合并染色。處理貼壁細胞時要小心操作，盡量避免機械損傷。消化時將胰酶鋪滿孔板底后，輕搖使胰酶與細胞充分接觸，然后倒掉大部分胰酶，利用剩余的少量胰酶再消化一段時間，待細胞間空隙增大，瓶底呈花斑狀即可終止。盡量不用含EDTA的胰酶消化液，EDTA會影響Annexin V與PS的結合。
- 如果樣品來源于血液，請務必除去血液中的血小板。血小板含有PS，可與Annexin V結合，從而干擾實驗結果?？梢允褂煤蠩DTA的緩沖劑并以200 g離心洗去血小板。
- 試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體集中至管底，避免開蓋時液體灑落引起損失。
- Annexin V-PE和PI是光敏物質，操作時請注意避光。
- 7-AAD為潛在致癌物，操作時請采取防護措施，穿防護服、戴手套等。
- 本產品僅用于科研。
使用說明
一、樣品染色
- 懸浮細胞：300 g，4℃離心5 min收集細胞。貼壁細胞：用不含EDTA的胰酶消化后，300 g，4℃離心5 min收集細胞。胰酶消化時間不宜過長，以防引起假陽性。
- 配制1×Binding Buffer：用去離子水4倍稀釋4×Binding Buffer（4 mL 結合緩沖液+12 mL 去離子水）。
- 用4℃預冷的PBS洗滌細胞2次，每次均需300 g，4℃離心5 min。
- 加入1×Binding Buffer重懸細胞，調節其濃度為1-5×106細胞/mL。
- 取100 μL細胞懸液于5 mL流式管中，加入5 μL Annexin V-PE，輕輕混勻后于室溫避光孵育5min。
- 加入10 μL PI（20 µg/mL）。
- 加入400 μL PBS Buffer，混勻，樣品在1小時內檢測。
【注意】為了避免洗滌細胞時損失細胞，在吸液時可以用大的Tip頭套上小的Tip頭吸液。
二、觀察檢測
- 流式細胞儀
- 用流式細胞儀檢測，Annexin V-PE的激發波長Ex=488nm；發射波長Em=578 nm，發出橙紅色熒光，建議使用FL2通道檢測；7-AAD的激發波長Ex=546 nm；發射波長Em=647 nm，發出紅色熒光，建議使用FL3通道檢測。用CellQuest等軟件進行分析，繪制雙色散點圖（two-color dot plot），PE為橫坐標，7-AAD為縱坐標。每個樣采集10,000 events。典型的實驗中，細胞可以分成三個亞群，活細胞僅呈很低強度的背景熒光，早期凋亡細胞僅呈較強的橙紅色熒光，晚期凋亡細胞呈橙紅和紅色熒光雙重染色。
- 熒光補償調節：使用未經凋亡誘導處理的正常細胞，作為對照進行熒光補償調節去除光譜重疊和設定十字門的位置。
- 熒光顯微鏡
- 滴一滴上述染色后的細胞懸液于載玻片上，并用蓋玻片蓋上細胞。
- 用PBS洗滌細胞兩次。
- 在500 μL的Binding Buffer 中加入1 μL Annexin V-PE，5 μL 7-AAD染液混勻。
- 將上述溶液滴加于蓋玻片表面，使長有細胞的蓋玻片表面均勻覆蓋。
- 室溫避光孵育5 min。
- 將蓋玻片倒置于載玻片上，在熒光顯微鏡下用雙色濾光片觀察。濾光片（羅丹明）觀察Annexin V-PE 熒光信號呈橙紅色；用激發波長546 nm，發射波長647 nm，觀察7-AAD熒光信號呈紅色。