pCMV/myc/ER/GFP 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)定位表達載體（陽性對照，哺乳動物細胞）
產(chǎn)品名稱： pCMV/myc/ER/GFP 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)定位表達載體（陽性對照，哺乳動物細胞）
英文名稱： pCMV/myc/ER/GFP 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)定位表達載體（陽性對照，哺乳動物細胞）
產(chǎn)品編號： 11913ES03
產(chǎn)品價格： 詢價
產(chǎn)品產(chǎn)地： Yeasen
品牌商標(biāo)： Yeasen
更新時間： 2024-12-10T13:22:33
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?pCMV/myc/ER/GFP
內(nèi)質(zhì)網(wǎng)定位表達載體（陽性對照，哺乳動物細胞）
產(chǎn)品信息
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產(chǎn)品名稱 |
產(chǎn)品編號 |
規(guī)格 |
儲存 |
價格 |
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pCMV/myc/ER/GFP 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)定位表達載體（陽性對照，哺乳動物細胞） |
11913ES03 |
1 μg |
-20℃ |
1218.00 |
產(chǎn)品描述
重組蛋白功能研究時，常需要將其在細胞內(nèi)定位到具體的細胞器，例如細胞核（nucleus）內(nèi)、細胞質(zhì)（cytoplasm）內(nèi)、線粒體（mitochondria）或內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（endoplasmic reticulum）上等。而細胞內(nèi)某種蛋白的存在部位取決于蛋白序列中的“定位序列”（targeting sequences）或“信號肽”，這些序列可能位于蛋白質(zhì)的N端、C端或蛋白質(zhì)內(nèi)部。一旦蛋白質(zhì)被轉(zhuǎn)運到最終細胞部位，這些序列可能會被保留，也可能被切除。研究者可以根據(jù)自己的研究目的，將感興趣的ORF片段構(gòu)建到表達載體中進行研究。
pCMV/myc/ER/GFP細胞質(zhì)定位表達載體（陽性對照，哺乳動物細胞）是以pcDNA3.0為基本骨架改造的質(zhì)粒，可進行哺乳動物細胞瞬轉(zhuǎn)和穩(wěn)轉(zhuǎn)，它在細胞質(zhì)內(nèi)高水平表達綠色熒光蛋白（green fluorescent protein，GFP）。作為細胞質(zhì)定位載體的陽性對照質(zhì)粒，它可用于優(yōu)化細胞系轉(zhuǎn)染條件，幫助確認目的蛋白在細胞質(zhì)內(nèi)的表達。
產(chǎn)品性質(zhì)
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質(zhì)粒類型（plasmid type） |
哺乳動物細胞表達 |
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大小（size） |
5762 bp |
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啟動子類型（promoter type） |
CMV |
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蛋白標(biāo)簽（protein tag） |
C端Myc標(biāo)簽 |
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抗性（bacterial resistance） |
Amp |
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最大激發(fā)光波長（excitation maxima） |
395 nm |
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二級激發(fā)光波長（Secondary excitation） |
478 nm |
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最大發(fā)射光波長（emission maxima） |
507 nm |
運輸和保存方法
冰袋運輸。
-20℃保存。有效期半年。長期保存，請保存于-80℃。
注意事項
1）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
2）本載體在綠色熒光蛋白C端加有Myc標(biāo)簽。
3）大多數(shù)培養(yǎng)基由于含有核黃素而發(fā)熒光，干擾GFP熒光檢測。因此，熒光檢測時，應(yīng)去除培養(yǎng)基，用PBS洗3次左右。
4）質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后，應(yīng)建立時間梯度摸索檢測細胞GFP的最佳時間，以判定轉(zhuǎn)染效率。因轉(zhuǎn)染細胞類型的不同，時間優(yōu)化在轉(zhuǎn)染后12?h至96?h不等。
pCMV/myc/ER MCS
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【注1】：pCMV/myc/ER/GFP是pCMV/myc/ER質(zhì)粒在PstⅠ限制性內(nèi)切酶和NotⅠ限制性內(nèi)切酶雙酶切后的部位插入GFP基因改造而得。
【注2】：信號肽包含一個內(nèi)含子和兩個外顯子。蛋白表達過程中，內(nèi)含子被切除，剩下信號肽的兩個外顯子及重組蛋白。
【注3】：編碼重組蛋白的目的基因CDS區(qū)位置需在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)信號肽的第二個外顯子后，即BssHⅡ至NotⅠ多克隆酶切位點之間。
【注4】：帶有信號肽的重組蛋白一旦轉(zhuǎn)移進入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，便會在絲氨酸處切割掉信號肽，若帶有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)滯留信號（ER retenti-on signal，SEKDEL），則蛋白就位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中。利用此質(zhì)粒表達的重組蛋白C端帶有SEKDEL肽和c-myc標(biāo)簽，因此重組蛋白分子大小會增加約2 kD。
【注5】：若基因CDS包含終止密碼子，則重組蛋白不帶有SEKDEL肽和c-myc標(biāo)簽，此時需根據(jù)蛋白本身性質(zhì)定位蛋白，如果該蛋白為分泌蛋白，則該蛋白會分泌；而如果該蛋白為非分泌蛋白，則該蛋白可能會非特異性的停留在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中。
【注6】：使用BssHⅡ酶切位點時，應(yīng)注意內(nèi)質(zhì)網(wǎng)信號肽（ER signal peptide）完整性。因此，設(shè)計引物時，應(yīng)在上游引物?5’端添加?BssHⅡ酶切位點至定位序列的最后一個堿基。
【注7】：pCMV/myc/ER質(zhì)粒上游測序引物為pCMV Forward primer，序列為5’-CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG-3’；下游測序引物為BGH Reverse primer，序列為5’-?TAGAAGGCACAGTCGAGG-3’。
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質(zhì)粒圖譜
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產(chǎn)品名稱 |
貨號 |
規(guī)格 |
價格（元） |
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11906ES03 |
1 μg |
1218.00 |
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