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什么是外泌體？
?? 外泌體（Exosomes）是大小為30-150nm、呈茶托狀的細胞外囊泡（Extracellular vesicles, EVs），廣泛存在于細胞培養上清及各種體液中，包括血液、淋巴液、唾液、尿液、精液、乳汁等。幾乎所有細胞都可以分泌外泌體，但是外泌體來源不同，其內部裝載的RNA、蛋白質、脂類等重要物質在數量和豐度上有很大差異。
外泌體的作用和功能
?? 外泌體可通過傳遞信息影響目標細胞的功能，激活細胞信號通路，在免疫、凝血、腫瘤等生理病理過程中發揮作用。外泌體可以作為臨床診斷中的生物標志物或疾病治療的靶點，同時也可以作為藥物載體，參與神經疾病和癌癥等多種疾病的病理過程。
外泌體研究之關鍵步驟—外泌體分離
?? 外泌體的分離純度對外泌體的功能研究非常重要，但是外泌體的分離一直是困擾外泌體研究人員的一個難題。雖然分離外泌體方法有很多種，包括差速超速離心法（超離）、超濾法、密度梯度離心法、免疫磁珠法、試劑盒法等，但目前文獻中常用的分離外泌體的方法主要是超離法和試劑盒法，那這兩種方法研究人員該如何選擇呢？為了解決大家的疑惑，我們專門做了對比實驗進行闡述。
超速離心法與試劑盒法比較：
一、實驗分組和開展實驗確定：
????? 此實驗共分為3組，每組設置2個重復，所選原始樣本是293T細胞培養上清。
????? 組1：超離法分離（UC-1，UC-2）；
????? 組2：使用某國外試劑盒SXX（SXX-1，SXX-2）；
????? 組3：使用某國內試劑盒UXX（UXX-1，UXX-2）。
????? 開展的實驗包括外泌體分離、透射電鏡（TEM）、納米顆粒檢測（NTA）、BCA、WB。
二、實驗結果如下：
1.外泌體分離方法：此處步驟比較長，內容篇幅有限，暫且省略步驟。
2.透射電鏡拍攝：先制片，再拍攝。制片是先將外泌體固定在銅網上，再用2%醋酸雙氧鈾染色液染色，隨后放于燈下烤10min，再拍照。

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從上面的圖片中可以看出，超離法相比較兩種試劑盒的分離效果，純度較高，電鏡圖片更清晰。
?? 和元生物可提供從實驗設計、外泌體分離、外泌體鑒定、外泌體高通量檢測、外泌體示蹤到體內外功能驗證的整體服務。
3.納米顆粒大小檢測：將外泌體樣本進行稀釋并檢測，儀器自動出分析報告。

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?? 從上圖結果可以看出，超離法和試劑盒法得到的外泌體大小差不多，基本在110-120nm，顆粒數濃度也相似，在3*10的10次方particles/ml左右。
4.BCA蛋白濃度測定結果：將外泌體樣本進行BCA蛋白濃度測定，結果如下表。WB檢測標志物結果：

5.?? ?WB標志物檢測：根據上述的BCA定量結果，制備樣本，上樣，做WB。
超離法由于BCA測定的濃度數值低，用了最大上樣量25ul，試劑盒法用的體積少一些，換算后每孔的蛋白總量如下：

選用外泌體標志物CD9和TSG101作為本次的檢測指標，實驗結果如下：

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?? 1、在CD9指標檢測中，超離法的兩個樣本UC-1和UC-2盡管每孔只用了4.5ug的總蛋白，但是兩孔中都能明顯看到CD9的蛋白條帶，而試劑盒樣本SXX-1、SXX-2、UXX-1和UXX-2每孔用了25ug蛋白，但是仍舊沒有看到條帶出現。
?? 2、在TSG101指標檢測中，上樣量和CD9的一樣，超離法和試劑盒法共6個孔都出現了條帶，但是超離法的UC-1和UC-2條帶亮度比較顯著。
?? 綜合上述BCA數據和WB結果可知，雖然超離法得到的外泌體蛋白濃度較低，但是其純度較高，基本就是真正的外泌體蛋白；而試劑盒法中雖然從BCA的數據來看蛋白濃度較高，但是WB結果說明了它的蛋白濃度并非真正的外泌體蛋白，含有很多雜質蛋白。
?? 本次數據全部來自于和元生物的測試數據，請勿擅自使用！
三、實驗結論分享：
?? 通過本次對超離法和試劑盒法效果的比較，可以發現，超離法經過多次離心步驟，可以獲得純度較高的外泌體，但是也會有一定的外泌體損失。試劑盒法雖然得到較多的外泌體，但是也有很多雜質混在一起。每種方法都有利弊，可以根據自己的需求選擇合適的方法。
?? 建議：如果做外泌體示蹤、細胞功能學或動物實驗，盡量選擇用超離法做，一方面這類實驗外泌體需求量比較大，超離法的通量較大，比較適合；另一方面這些實驗對外泌體的純度要求比較高，超離法的雜質去除相對比較干凈，不至于讓別人懷疑實驗的其他可能性。
?? 和元生物一直致力為外泌體研究提供整體解決方案，從實驗設計、外泌體分離、外泌體鑒定、外泌體分子檢測到外泌體示蹤和體內外功能驗證，豐富的項目經驗、專業的科研團隊、優質的技術支持服務，為您的項目保駕護航！