VSV載體骨架假病毒定制服務

DIFF VSV假病毒產品及服務信息：

什么是假病毒？

假病毒（Pseudovirus）是指經過改造后的病毒顆粒。將病毒顆粒進行人工改造，保留其部分特性的同時，成為無致病性的假病毒顆粒。在病毒性傳染病防治過程中，通過小分子、中和抗體等抑制病毒入侵細胞是關鍵的一環，假病毒在這一過程的研究中具有獨特的優勢。相較于“真”病毒，其安全性高，即使是高致病性病毒對應的假病毒，也不需要在高生物安全等級（BSL3/ BSL4）實驗室操作。

VSV病毒介紹

VSV是Vesicular Stomatitis Virus的縮寫，中文名稱為“水皰性口炎病毒”，屬于水皰病毒屬，彈狀病毒科（Rhabdoviridae），其外形如同其名字呈現出子彈型。

VSV的基因組結構

野生型的VSV是一種由包膜病毒，其病毒體結構呈彈狀或桿狀，擁有一條單鏈負義RNA基因組（-ssRNA），并且其復制依賴病毒的RNA聚合酶（RNA-dependent RNA polymerase，RdRp）。含有5種結構蛋白：核蛋白（N），磷酸化蛋白質（P），RNA聚合酶（L），基質蛋白（M）以及糖蛋白（G）。

圖1.VSV結構蛋白示意圖

圖片來源：知乎

VSV感染靶細胞時，其中的G糖蛋白誘導細胞發生內吞作用，幫助病毒侵入細胞。侵入細胞后，VSV的組裝發生在質膜上，病毒粒子從細胞表面出芽，在出芽時VSV 獲得一個包膜，該包膜包含源自質膜的脂質雙層和G 蛋白三聚體的刺突蛋白。這一包膜過程的顯著特性之一是，VSV病毒粒子對可摻入病毒包膜的膜蛋白類型沒有特別的選擇性，當細胞與VSV和其他包膜病毒共感染時，VSV很容易包被其他病毒的膜蛋白。VSV病毒粒子在沒有G糖蛋白的情況下可以出芽，再加上異源糖蛋白可以摻入VSV的性質，由此誕生了重組VSV病毒(rVSV)，其中糖蛋白G 的基因被報告基因取代，例如 GFP、RFP等熒光蛋白、螢光素酶或其他易于檢測的分泌酶（SEAP；分泌的人胎盤堿性磷酸酶）等，成為rVSV-ΔG，而其包膜蛋白來自待研究的異源病毒。

應用場景：

1.病毒入侵機制研究?
如通過替換異源包膜蛋白（如新冠病毒S蛋白），模擬高危病毒入侵過程，解析受體結合（如ACE2）及膜融合機制，規避高等級實驗室需求。

2.疫苗與藥物開發?

疫苗載體：如首個獲批的埃博拉疫苗rVSV-ZEBOV（V920），用ZEBOV GP蛋白替換VSV-G，誘導強效免疫應答。

中和抗體評價：假病毒中和試驗（pVNT）可快速評估疫苗或抗體對變異株（如Delta、Omicron）的保護效果。

3.診斷質控品開發?
攜帶新冠病毒靶基因（ORF1ab、N基因）的VSV假病毒，可作為核酸檢測陽性對照，驗證試劑靈敏度及操作規范性，避免活病毒使用風險。

4.抗病毒藥物篩選?
假病毒結合報告基因，高通量篩選阻斷病毒入侵的抑制劑或抗體，如針對S蛋白-ACE2結合的小分子藥物。

DIFF 假病毒系統

迪福潤絲生物通過在VSV載體中插入報告基因eGFP或Luciferase，用其他病毒的囊膜蛋白替換VSV載體的關鍵蛋白，形成了各種可定制化的假病毒。

相較于ELISA等方法，VSV假病毒檢測方法具有以下優勢：

l 高通量：增強了結果讀取的便捷性、客觀性，適合批量檢測；

l 可復制性：更高的仿真度，可以更好地模擬感染的真實過程，增強結果可信性；

l 降低生物安全等級：可降低生物安全等級要求，篩選安全等級要求高的抗病毒藥物。

服務案例：

圖2.疫苗鼻腔免疫后滴鼻途徑感染VSV新冠假病毒活體成像

圖3.疫苗鼻腔免疫小鼠后滴鼻途徑感染VSV新冠假病毒后存活率

圖4.VSV狂犬假病毒熒光斑點觀測結果

圖5.VSV狂犬假病毒中和實驗抑制率曲線

圖6.VSV-H5N1假病毒熒光斑點觀測結果

圖7.VSV-H5N1假病毒中和實驗抑制率曲線

圖8.VSV-SFTSV假病毒熒光斑點觀測結果

基于VSV假病毒的中和抗體檢測

迪福潤絲生物自有的CRO服務平臺「DIFF+」可利用DIFF VSV假病毒提供基于熒光斑點計數法的中和抗體檢測服務，檢測流程（圖4）如下：

圖9. 中和抗體檢測流程圖

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參考文獻：

[1]Whitt MA. Generation of VSV pseudotypes using recombinant ΔG-VSV for studies on virus entry, identification of entry inhibitors, and immune responses to vaccines. J Virol Methods. 2010 Nov;169(2):365-74.

[2]Nie, J., Li, Q., Wu, J. et al. Quantification of SARS-CoV-2 neutralizing antibody by a pseudotyped virus-based assay. Nat Protoc 15, 3699–3715 (2020).