熒光定量PCR的歷史：

熒光定量PCR是PCR的一種。PCR儀目的為了基因擴增。在基因擴增中最重要的就是升降溫過程，最早的PCR就是三個水浴鍋,一個機械臂，定時抓出反應槽轉換水浴鍋。PCR的結果需要借助其他手段來檢測。后來隨著定量技術的發展，將PCR和檢測做成一體，就形成了定量PCR儀。由于應用的是熒光技術，同時在每個擴增過程都能實施監控，所以標準的叫法為實時熒光定量PCR儀。準確的講實時熒光定量PCR沒有自動加樣和標本處理系統，只能算半自動的。PCR儀簡單的講，就是一個溫控設備和一個檢測設備。

熒光實時定量PCR技術最早是在1992年由一位日本人Higuchi第一次報告提出的，他當時想實時地看到PCR反應的整個過程，由于當時EB（溴化乙錠）的廣泛使用，最直接想到的標記染料就是EB，可以插入到雙鏈核酸中受激發光，在PCR反應的退火或延伸時檢測摻入到雙鏈核酸中EB的含量就能實時監控PCR反應的進程，考慮到PCR反應的數學函數關系，結合相應的算法，通過加入標準品的方法，就可以對待測樣品中的目標基因進行準確定量。這樣，在普通PCR儀的基礎上再配備一個激發和檢測的裝置，第一臺實時定量PCR儀就誕生了。

熒光定量PCR的技術

定量PCR技術自產生以來，不斷發展完善，到目前為止已經非常成熟了。標記方法由最初單一的染料法，發展到了特異性更高的探針法，如Taqman、Molecular Beacon、Fret等不同方法的標記探針，其中由于Taqman探針的廣泛使用，實時定量PCR的方法也稱為Tagman法。
在過去很長一段時間里，由于PCR檢測的靈敏性和不穩定性，容易產生假陽性，國家對這種檢測方法在臨床上的應用是禁止的。但是隨著熒光定量PCR技術的發展成熟和完善，特別是Taqman方法的廣泛使用，使得熒光定量PCR以一種新的PCR檢測技術得以在在臨床檢測上使用，如對病毒、病菌及其它致病微生物，致病基因的檢測。

Taqman探針法具有高適應性和可靠性，實驗結果穩定重復性好；由引物、探針序列和引物探針相互作用關系的雙重保證克服了普通PCR的缺陷，現在國家對這方面的限制正逐步解開，目前正在規范相應的法律法規，為熒光定量PCR技術在分子診斷中的廣泛使用做準備工作。

最常用的有三種檢測模式：

1、R Green I檢測模式。
2、Taqman探針法
3、雜交探針

熒光定量檢測技術的優勢

相對于抗原抗體法檢測具有以下優勢：
1. 研發方便，設計探針和摸定反應條件可以在短時間內完成，順利的話，只需幾次反應和幾天的工作量就可以完成一種檢測方法的建立。而拿到一個好的抗體至少需要一個完整的免疫周期，還不考慮篩選獲得一個高特異性、高滴度免疫株的成功幾率。
2. 檢測靈敏度高，是一個基于PCR的信號放大檢測系統。
3. 可以準確定量。

熒光定量PCR的應用

熒光定量檢測技術在臨床診斷方面很多，主要集中在各種病原體引起疾病的臨床診斷，如肝炎類疾病、性病、與優生優育相關的疾病以及肺結核等等。

熒光定量PCR的應用不僅限于臨床檢測，在基礎研究和海關、食品衛生檢疫方面的應用前景都相當廣泛。

基礎研究中，對某一樣品中目標基因含量的測定需求是相當廣泛的，熒光定量PCR技術具有操作方便、反應快速的特點，可以對一些微量樣品進行檢測。所以在新藥開發、超早期感染用藥物及療法的研究與開發、藥物療法研究、新診斷及檢驗試劑的開發、血液檢驗漏檢率等方面，熒光定量PC技術有著廣泛的應用前景。

在海關衛生檢疫方面，進口的糧食、食品、花果是否安全，是否含有危險或潛在危險的成分，都可以用熒光定量PCR技術進行檢測。一些瘟疫流行地區進口的相關食品也需要進行檢測，比如前一段時間，歐洲流行瘋牛病，日本流行豬口蹄疫，那么從這些地區進口相應的肉品及肉類加工產品，就要進行食品衛生檢疫

在食品衛生檢疫方面，如轉基因食品，由于其是否安全目前尚無定論，因此有些國家明確規定轉基因食品需要標簽標識區分，我國也正在出臺類似的法律法規。

此外一些生物類的恐怖襲擊等，都可以用熒光定量PCR的方法進行快速檢測。

所以熒光定量PCR最明顯的對象主要是醫院的檢驗科、中心實驗室、臨檢中心、地方的疾病控制中心、生物技術公司、血液制品相關的部門。當然科研院所、學校是少不了的。

熒光定量PCR儀技術指標比較

熒光定量PCR簡單講即溫控設備pcr和熒光檢測系統、計算機及軟件系統。

關于溫控，包括溫度的均一性、升降溫速度。主要是介質問題。理想的介質是要求導熱性好、比熱大、接觸緊密。

水浴和油?。簻乜氐氖走x，比熱大（油比水更大）、與反應物無縫接觸，效果當然最好。
缺點不能自動化、小型化，只有最初的水浴鍋式使用。
硅加熱：Peltier這是使用最普遍的一種，優點：易自動化、速度快、直接加熱降溫，效果當然好，
缺點1、成本較高；

2、第二其使用的介質是金屬，導熱雖然好，但是與反應管，很難做到無縫接觸，定性時代可以加油，但用熒光定量，由于油有熒光信號不能用。所以在無縫接觸上差一些。
空氣加熱：與反應體系無縫接觸
缺點：空氣的導熱性差、比熱小的弱點明顯。因此空氣加熱的要利用離心來產生空氣流動，增強導熱性，同時使用毛細管，加大接觸面積、試劑微量化來彌補。這樣做了以后效果還是不錯。
同時，使用離心，對標本量增大是有影響的，并且標本量越大，空氣比熱小的弱點就越明顯，所以空氣加熱的儀器標本量都比較小。使用毛細管后由于反應液與管的接觸面積增大，吸附現象更大，因此試劑的通用性差，一般要專門開發，成本高，雖然試劑用量少，但因為是專用試劑，每人份就是以實際量算，并不省試劑。反而增加了毛細管成本。
關于功能，所有的PCR儀功能都大體相同。只有MJ孔間能使用不同溫度比較獨特，這對于多項目同時檢測以及循環參數的調整比較有用。但其實時熒光的儀器剛進入中國不久，

所以這樣就可以把市面上的產品分兩類，半導體Peltier和空氣。其中羅氏的LightCycler和Corbert的RotorGene是用空氣加熱，其余是Peltier
當然加熱還有電熱絲+半導體，致冷還有壓縮機
空氣的加熱的標本量為32/批，其他96/批，iCycler 能達到384/批，這也難怪，是擴增儀上加裝定量模塊而成，所以如果標本量大，建議不要用羅氏。