產品說明
半乳糖(c6h12o6)是一種存在于乳制品，甜菜，樹膠和糖漿中的單糖。其在哺乳動物體內合成并以糖脂和糖蛋白的形式存儲于若干組織中。當與葡萄糖結合就形成雙糖乳糖。簡單，直接和高通量的半乳糖濃度檢測方法被廣泛地應用。博世生物技術公司的半乳糖測試盒使用特殊的酶促反應形成有色產物。反應產物的吸光強度(570nm)或熒光強度(585/530nm)與樣品中半乳糖的濃度成正比。
產品特點
只須20mL樣品。96-孔板線性檢測范圍：比色法10-1000?mM，熒光法?10?-100?mM半乳糖。
適用范圍
直接檢測：生物樣品如血清、血漿、尿液、唾液、乳汁、培養基中的半乳糖。
藥物開發/藥理學：藥物對半乳糖代謝的影響。
食品和飲料：?檢測食品和飲料中的半乳糖濃度。
試劑盒組成(96孔板供100份檢測)
???緩沖液：?10??mL???????????酶試劑：120?mL???????
???顯色劑：120?mL????????????標準液：1?mL??10?mM半乳糖溶液
???貯藏條件：試劑盒應用干冰運輸，所有試劑均于-20°C保存。簽收后3個月內有效。
注意事項：本產品僅供研究用。使用過程中應嚴格遵循實驗安全措施。
比色法檢測
注意:?(1)甘油和含巰基的試劑(如β-巰基乙醇，二硫蘇糖醇>?5?mM)可干擾這項檢測?，故應在樣品準備過程中避免使用。(2)此法是基于動力學反應，為了確保相同的培養時間，向標準品和樣品中添加工作試劑應迅速，混合應迅速完全，推薦使用多通道移液器。
樣品準備:?血清和血漿樣品可直接測驗。牛奶樣品應按100?mL?6N?HCl和600?mL?milk的比例混合，以14000rpm的轉速離心并轉移上清液到一潔凈管，每毫升上清液添加170?mL?6N?NaOH中和。并再以14000rpm的轉速離心。取上清液檢測。在此過程中稀釋系數n?=?1.36。
1.?將所有試劑放置至室溫。檢測過程中將已解凍的酶試劑始終置于冰箱內或者冰上。
2.?標準品和樣品:?將40mL?10mg/dL標準液與360mL?蒸餾水dH2O混合制備400mL1000mM標準品。用dH2O稀釋標準品，比例如下：
No
1000?mM?STD??+??H2O
Vol?(mL)
Galactose?(mM)
1
100?mL?+????0?mL
100
1000
2
???80?mL?+??20?mL
100
??800
3
???60?mL?+??40?mL
100
??600
4
???40?mL?+??60?mL
100
??400
5
??30?mL?+??70?mL
100
??300
6
??20?mL?+??80?mL
100
??200
7
??10?mL?+??90?mL
100
??100
8
????0?mL?+100?mL
100
??????0
?
轉移20?mL標準和樣品至每個孔內。
3.?反應:??對每個反應孔按85?mL?緩沖液,?1?mL?酶試劑(在移液前稍微搖晃),?和1?mL顯色劑的比例配制足量工作試劑，向每孔
加入80?mL工作試劑。輕輕振蕩混勻,?室溫下培養20分鐘。
?4.?讀取570nm波長處(波長范圍550-585nm)的吸光度。
熒光法檢測
對于熒光法檢測，線性檢測范圍為10?-100?mM半乳糖。將10?mL?10mM標準品與990?mL蒸餾水混合制備100mM半乳糖。用蒸餾水稀釋得到100、80、60、40、30、20、10和0mM的標準品。
1.轉移20?mL標準品和20?mL樣品至黑色96孔板中各自的孔內。
2.添加80?mL工作試劑，輕輕振蕩混勻。室溫下培養20分鐘。
3.讀取熒光強度(585/530nm)
注意：(1)如果計算出樣品中半乳糖的濃度高于1000?mM(比色法)或者100?mM(熒光法)，用水稀釋樣品并再次檢測，用稀釋系數n乘以結果。
濃度計算
從標準品的測值中減去空白對照的測值(水，#8)，繪制DOD或DRFU與標準濃度的曲線。測定斜率(Slope)并計算樣品中半乳糖的濃度,
?
ODSAMPLE,?ODH2O分別是樣品和H2O的吸光度。RFUSAMPLE,?RFUH2O?分別是樣品和H2O的熒光強度，n是樣品稀釋系數。
單位換算：1?mM半乳糖相當于18?mg/dL,?0.018%?or?180?ppm。
實驗必需品(未提供)
移液器、離心管、透明平底96孔板、吸光度分析儀、黑色平底96孔板、熒光分析儀。