鈣的測量對于許多生物學研究至關重要。熒光探針顯示結合Ca²⁺后的光譜響應，使研究人員能夠通過熒光顯微鏡，流式細胞儀，熒光光譜和熒光酶標儀研究細胞內游離Ca²⁺濃度的變化。Rhod-2常用于紅色熒光鈣指示劑中。然而，Rhod-2 AM在酯酶水解后僅在活細胞中發生中度熒光，并且具有非常小的細胞鈣響應。

Rhod-4™為您帶來了：

更明亮的熒光：更高的基底熒光強度。

更巨大的變化：結合鈣離子后顯著的熒光增強。

更可靠的數據：能夠分辨更細微的生理或藥理變化。

產品說明書

操作步驟

1.準備HHBS緩沖液，10％Pluronic®F-127溶液和25 mM Probenecid溶液。

2.在高質量無水DMSO中制備2 mM至5 mM Rhod-4 ，AM原液。
2.1使用量的Rhod-4 ，AM：1 mg
2.2所需濃度：2 mM
2.3在合適的容器中，將1mg Rhod-4，AM與492.15μL無水DMSO混合。

3.使用10μMRhod-4 ，AM 4在HHBS中制備2X工作溶液，0.08％Pluronic®F-127和2 mM丙磺舒。
3.1最終井內濃度的Rhod-4 ，AM：5μM
3.2Pluronic®F-127的最終井內濃度：0.04％
3.3最終孔內濃度的丙磺舒：1mM
3.4在合適的容器中混合16μL的Rhod-4 ，AM，25.6μL的10％Pluronic F-127和256μL的25mM丙磺舒。然后，添加HHBS或您選擇的緩沖液，直到體積為3.2 mL。
注意：對于大多數細胞系，我們建議使用Rhod-4 的最終濃度，AM為4至5μM。
注意：推?的Pluronic F-127孔濃度最終為0.02％至0.04％。
注意：推薦的最終濃度為1至2.5 mM的Probenecid。

4.將100μL染料工作溶液加入已經含有100μL培養基的所需孔中。
4.1該步驟將染料工作溶液從2X稀釋至1X，并將每種組分的最終濃度調節至以下：5μM的Rhod-4 ，AM，0.04％Pluronic F-127,1mM丙磺舒。

5.孵育染料
5.1將染料加載板在細胞培養箱中孵育20-120分鐘。
5.2將染料加載板在室溫下孵育30分鐘。

6.用1.0 mM Probenecid準備HHBS緩沖液（或您選擇的緩沖液）。
6.1在合適的容器中加入160μL的25mM丙磺舒。接下來，添加HHBS或您選擇的緩沖液，直到體積為4 mL。

7.用HHBS緩沖液或您選擇的緩沖液替換染料工作溶液，使用1.0 mM Probenecid。
7.1首先，從所需孔中除去200μL染料工作溶液和培養基。
7.2在相同的孔中加入200μL含有1.0mM丙磺舒的HHBS（或您選擇的緩沖液）。

8.運行實驗
8.1為您的樣品添加所需的處理。
8.2以Ex / Em = 524/551 nm運行實驗。

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