Discover-sc??WTA Kit V2

單細胞轉錄組測序文庫構建最佳搭檔

模板起始量低：單個細胞或10pg Total RNA即可作為起始模板，進行高效擴增

擴增靈敏度高：使用LNA技術及精心優化的反應體系，大幅度增加了低表達基因的檢出量

產物完整性好：通過雙端引物擴增全長cDNA，獲得全轉錄組信息，避免了5和3偏好性

操作成功率大：大大減少了RNA樣品的處理，從而最大限度避免了樣品損失的風險，提高了操作成功率

體積兼容性廣：樣品兼容體積可高達5 μl，兼容不同濃度的模板進行擴增?

1.模板起始量低，擴增產物cDNA完整性好

10 pg 293T細胞Total RNA用Discover-sc??WTA Kit V2進行擴增，取1 μl cDNA擴增產物用Agilent 2100 Bioanalyzer進行分析。試劑盒以Oligo dT Primer為逆轉錄引物，并利用Discover-sc??Reverse Transcriptase的Template-switching活性在cDNA的3’端添加一段接頭序列，通過該接頭序列進行后續的PCR擴增，獲得全長cDNA擴增產物，同時避免了rRNA的污染。

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2.文庫質量分析—數據基本指標

Vazyme-1和Vazyme-2是單個293T細胞經過Discover-sc??WTA Kit V2 進行擴增，C-1和C-2是單個293T細胞經過用C公司單細胞轉錄組試劑盒進行擴增，取1 ng cDNA擴增產物經TruePrep??DNA Library Prep Kit V2 for Illumina構建文庫。以下均為此文庫數據分析。

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3.基因表達總體情況分析

Discover-sc??WTA Kit V2試劑盒擴增產物檢測靈敏度高，單個293T細胞檢測到基因數高達15000個。

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4.數據分布均一，無偏好性

左圖為Vazyme-1測序片段在基因上的分布結果，右圖為C-1測序片段在基因上的分布結果，數據顯示Discover-sc??WTA Kit V2擴增很好的保證了基因5’和3’的覆蓋。

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5.表達重復相關性高

左圖為Vazyme-1和Vazyme-2表達重復相關性分析，右圖為C-1和C-2表達重復性相關性分析。數據結果表明表達重復相關性高于C公司。