MicRNA過表達及干擾服務
產品名稱： MicRNA過表達及干擾服務
英文名稱： MicRNA過表達及干擾服務
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簡介
MicroRNA（miRNA）最早在線蟲中發現，大多數存在于真核生物中包括人。預測miRNA占人類基因組的1-5%，至少調控30%的基因的表達。它是一類18-28bp的非編碼小RNA，在細胞內參與細胞分化、細胞周期、細胞凋亡等多種重要的調節過程。它能夠通過與靶mRNA特異性結合，通過對靶序列降解或者抑制其翻譯兩種途徑對基因進行轉錄后的表達調控。很多數據表明MicroRNA的表達和腫瘤的發生或抑制有關系，包括乳腺、消化道、肺、甲狀腺和血液系統等腫瘤疾病。
作用機制
miRNA首先在細胞核內轉錄出較長的初級miRNA（primary miRNA，pri-miRNA），然后在核心內由Drosha加工成發夾狀RNA，即前體miRNA（miRNA precusor，pre- miRNA），在Exprotin-5復合物的幫助下被轉運出胞核，在胞漿中由Dicer剪切成為成熟的miRNA，隨即被整合進RNA沉默復合物（RISC）中，基于與mRNA完全或不完全配對來調節基因表達。
圖1.MicroRNA的發生和作用機制（Clinical and functional aspects of microRNA regulation in human cancers，modified）
服務說明
miRNA的功能研究可通過病毒載體AAV、LV介導的過表達和干擾技術來實現。
miRNA-AAV/LV過表達，MicroRNA過表達載體的構建可以采用miRNA的前體序列作為目的基因插入載體,也有研究采用的是包含microRNA前體序列兩端的側翼序列在內的核苷酸并經基因組DNA擴增后作為目的基因插入到AAV或者LV病毒載體中，生產的病毒顆?？梢灾苯佑糜诟腥炯毎蛘邉游飳嶒?。
miRNA-AAV/LV干擾，采用反義寡核苷酸抑制其活性或下調其表達水平。設計構建到AAV或者LV病毒載體中，生產的病毒顆?？梢灾苯佑糜诟腥炯毎蛘?/span>動物實驗。
服務流程
交付內容：
3、過表達、干擾質粒/病毒/穩定細胞系
應用案例
圖2. miR-708功能研究（Chen et al. Silencing of microRNA-708 promotes cell
growth and epithelial-to-mesenchymal?transition by activating the SPHK2/AKT/
β-catenin pathway in gliomaCell Death and Disease (2019) 10:448）
實驗目的：研究miR-708在神經膠質瘤發生或抑制過程中的作用。
方法及結論：用LV載體介導miR-708的過表達，結合體內體外實驗來驗證miR-708的功能。用LV-miR-708（實驗組）和LV-miRNA（對照組）分別感染膠質瘤細胞，MTT實驗結果顯示感染感染LV-miR-708（實驗組）的細胞存活率明顯比對照組低；克隆形成實驗也表明實驗組的單克隆數量減少；EDU實驗也顯示實驗組的細胞增殖顯著緩慢。研究者同時將細胞系種植到體內，一段時間后從小鼠體內取出異種移植瘤，瘤重量和ki-67數據表明miR-708可以抑制膠質瘤的發生。
參考文獻