?操作步驟：

1. 制備臟器組織的單細胞懸液。

2. 在離心管中加入適量分離液（細胞懸液體積小于5mL時，加入5mL分離液；大于等于5mL，加入等體積分離 液。但二者的總體積不能超過離心管的三分之二，否則會影響分離效果），將細胞懸液平鋪到分離液液面上 方，注意保持兩液面界面清晰。（可以使用巴氏德吸管吸取細胞懸液，然 后將細胞懸液小心的平鋪于分離液上，因為兩者的密度差異，將形成明顯 的分層界面。如果樣品較多，加樣的時間較長，在離心之前出現紅細胞成 團下沉屬正?，F象。）

3. 室溫，水平轉子500~1000g，離心20~30min（細胞懸液的體積越大所需的 離心力越大，離心時間越長，最佳的分離條件需摸索，離心轉速最大不超 過1200g）。

4. 離心后將出現明顯的分層：最上層是稀釋的稀釋液層；稀釋液與分離液之 間是淋巴細胞層；分離液中為粒細胞層（個體差異或者是分離條件不同， 粒細胞層可能分離不明顯）；最下層為紅細胞層。

5. 小心的吸取淋巴細胞層及分離液層細胞到15mL潔凈的離心管中，10mL PBS或細胞洗滌液洗滌細胞。250g，離心10min（如有紅細胞混雜則加入 適量紅細胞裂解液）

6. 棄上清，5mL的PBS或細胞清洗液重懸細胞，250g，離心10min。

7. 重復步驟6 8. 棄上清，細胞重懸備用