總黃曲霉毒素酶聯免疫分析（ELISA）
試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用
1 使用目的：本試劑盒用于飼料、魚、蝦和肉類組織（如雞、牛肉和豬肉），雞蛋、蜂蜜、牛奶、血清和尿樣中總黃曲霉毒素殘留的定量檢測。
2 實驗原理
本試劑盒采用競爭ELISA方法，在微孔板包被有總黃曲霉毒素偶聯抗原，加入總黃曲霉毒素標準品或樣品，游離總黃曲霉毒素與微孔條上預包被的總黃曲霉毒素偶聯抗原互相競爭抗總黃曲霉毒素抗體酶標記物，用TMB底物顯色，加入終止液后顏色由藍色變為黃色，用酶標儀在450nm波長下進行檢測，吸光值與樣品中總黃曲霉毒素含量成反比，通過標準曲線計算樣品中總黃曲霉毒素的含量。??
3 試劑盒組成 
3.1 預包被的總黃曲霉毒素偶聯抗原的可拆酶標板：1塊（12孔×8條）。
3.2 總黃曲霉毒素標準品：6瓶（1ml/瓶），含量分別是： 0 ng/ml，0.5?ng/ml,2?ng/ml,20?ng/ml,200?ng/ml,400?ng/ml。
3.3抗總黃曲霉毒素抗體酶結合物：1瓶（6ml）。
3.4顯色液A：1瓶（6ml）。
3.5顯色液B：1瓶（6ml）。
3.6終止液：1瓶（6ml），2M硫酸。
3.7樣本稀釋液：1瓶（10×, ?6ml），用于樣品稀釋用。
3.8濃縮洗滌液：1瓶（20×，20ml），用于洗板。
3.9說明書一份。

4 需要而未提供的材料
4.1 設備
4.1.1波長450nm酶標儀。 
4.1.2粉碎機。
4.1.3量筒。
4.1.4振蕩器。
4.1.5漏斗。
4.1.6Whatman No 1或相當的濾紙。
4.1.7微量移液器。
4.2 試劑
4.2.1去離子水或蒸餾水。
4.2.2 甲醇。
5 貯存
5.1 試劑盒貯存于2~8℃，切勿冷凍
5.2 未用完的微孔板應該密封干燥保存
6 注意事項
6.1 使用試劑盒前請仔細閱讀說明書。
6.2 不要使用過期試劑盒。
6.3 試劑盒使用前，將試劑恢復至室溫（25±2℃），建議至少回溫2小時。
6.4 標準品中含有總黃曲霉毒素，使用時應特別注意，操作時應帶手套。
6.5 終止液中含有硫酸，使用時防止灼傷皮膚及腐蝕衣物。
6.6 不同標準品、樣品所用吸頭不能混用，否則會影響試驗結果。
6.7 不同批號試劑盒中的試劑不得混用；不同標準品、樣品所用吸頭不得混用，否則會影響實驗結果。
6.8 稀釋樣本時必須用本試劑盒中的樣本稀釋液，否則會影響實驗結果
6.9 混合試劑時應避免起泡。
7 工作液準備
7.1總黃曲霉毒素標準品溶液：0 ng/ml，0.5?ng/ml,2?ng/ml,20?ng/ml,200?ng/ml,400?ng/ml
7.2 濃縮洗滌液：用蒸餾水按1:20(1+19)稀釋備用
7.3 樣本稀釋液：已備用
7.3 顯色劑：已備用，避免光線直照
7.4 反應終止液：已備用
8 樣品處理：（樣品在提取過程中，要嚴格按說明書操作，提取過程中應準確稀釋，否則會出現結果不準確，樣品應當保存在陰涼避光之處及冷藏保存）
一般樣品處理
8.1取10g粉碎的樣品，加 20ml 70%甲醇溶液
8.2強力振蕩3分鐘
8.3用Whatman No 1濾紙過濾
8.4取100μl處理后的樣品，加入400μl樣本稀釋液
8.5取100μl稀釋液進行分析
動物組織前處理
8.6準確稱取1±0.05?g勻漿后的組織樣品到50?ml的聚苯乙烯離心管中；加入3ml乙*--丙酮提取溶液，2000rpm劇烈震蕩20s后4000r/min以上離心5min
8.7取上清液0.8ml在50℃氮氣流下吹干
8.8加入3.2mL樣品稀釋液, 750rpm渦旋20s
8.9取100ml用于分析??
飼料前處理方法
8.10準確稱取1±0.05?g粉碎飼料樣品到50?ml的聚苯乙烯離心管中；加入4ml乙*，1ml丙酮，2000rpm劇烈震蕩20s后4000r/min以上離心3min
8.11取上清液0.7ml在50℃氮氣流下吹干
8.12加入2.8mL樣品稀釋液,渦旋20s，混勻后取100ml用于分析
牛奶前處理方法
8.13取1 ml牛奶樣品到5?ml聚苯乙烯離心管中；加入4ml樣品稀釋液，混勻后取100mTUNEology 波長可調檢測卡盒-->