Celthy siRNA/miRNA體外轉染試劑
產品名稱： Celthy siRNA/miRNA體外轉染試劑
英文名稱： Celthy siRNA/miRNA In vitro transfection reagent
產品編號： C130004
產品價格： null
產品產地： 美國
品牌商標： Arcegen
更新時間： 2025-10-20T09:25:48
使用范圍： null
| 規格 | 價格 |
| 1ml | 3200.0 |
| 0.5ml | 1800.0 |
| 100ul | 260.0 |
- 聯系人 : 孟醒
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- 郵編 : 201314
- 所在區域 : 上海
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<p style="font-weight: 400;"><strong><span style="color: #f39800;">產品簡介</span></strong></p> <p style="font-weight: 400;">Celthy siRNA/miRNA體外轉染試劑可對廣泛的細胞系中提供優異的高轉染效率，適用于siRNA/miRNA介紹的基因研究。該轉染試劑是專效的PEI陽離子、兩性分子轉染試劑，可與siRNA/miRNA形成陽離子復合物，并通過內吞作用進入細胞，再通過胞內質子交換作用，使得復合體釋放外源siRNA/miRNA進入細胞質。本產品具有如下特點：</p> <p style="font-weight: 400;">適用于siRNA和miRNA的轉染；</p> <p style="font-weight: 400;">能實現1 nM的siRNA超過90%的表達效率，避免了脫靶效應；</p> <p style="font-weight: 400;">適用于多種細胞轉染，包括Hela、MCF-7、HepG2、CHO等貼壁細胞；</p> <p style="font-weight: 400;">適用于難以轉染的懸浮細胞系（如：K562或THP-1細胞），可達到80%的沉默效率；</p> <p style="font-weight: 400;">適用于部分原代細胞（如：原代人成纖維細胞、原代人肝細胞等），可達到80%的沉默效率。</p> <p style="font-weight: 400;"> </p> <p style="font-weight: 400;"><strong><span style="color: #f39800;">運輸與保存方法</span></strong></p> <p style="font-weight: 400;">冰袋（wet ice）運輸。產品2-8 ℃保存，一年有效。<strong>不可冷凍！</strong></p> <p style="font-weight: 400;"> </p> <p style="font-weight: 400;"><strong><span style="color: #f39800;">注意事項</span></strong><strong> </strong></p> <p style="font-weight: 400;">1）整個實驗過程使用無RNA酶和無熱原性的材料，如離心管、槍頭、緩沖液。</p> <p style="font-weight: 400;">2）轉染前，確保siRNA是經過PAGE純化和脫鹽處理過的，高純度的siRNA或者miRNA有助于獲得較高的轉染效率。</p> <p style="font-weight: 400;">3）PEI陽離子轉染試劑應該在2-8 ℃保存，要注意避免多次反復長時間開蓋，否則可能會導致PEI揮發，降低轉染效率。</p> <p style="font-weight: 400;">4）轉染前一天，確保接種貼壁細胞密度在30%-50%左右，對于一些小細胞和生長緩慢的細胞，接種密度可適當擴大2倍。</p> <p style="font-weight: 400;">5）轉染前，確保siRNA/miRNA基因沉默表達不會影響細胞活力。</p> <p style="font-weight: 400;">6）該產品只適合體外轉染，不能用于體內轉染。</p> <p style="font-weight: 400;">7）本產品僅作科研用途！</p> <p style="font-weight: 400;"> </p> <p style="font-weight: 400;"><strong><span style="color: #f39800;">操作流程</span></strong></p> <p style="font-weight: 400;"><strong><span style="color: #000000;">一．貼壁細胞轉染（以24孔板和終濃度50 nM siRNA為例，其他培養板加樣體積請參考表1）</span></strong><br /><strong><span style="color: #000000;">接種貼壁細胞</span></strong></p> <p style="font-weight: 400;">1.為了提高轉染效率，建議在轉染前一天接種細胞，接種細胞密度建議30%-50%左右，建議初次使用時設置梯度進行優化最佳使用量。</p> <p style="font-weight: 400;">2.按照以下體系配制siRNA-PEI或miRNA-PEI核酸轉染試劑陽離子復合物：<strong> </strong></p> <p style="font-weight: 400;">1）對于每孔細胞，使用100 μL無血清培養基（如OPTI-MEM培養基）稀釋30 pmoles siRNA，混勻。</p> <p style="font-weight: 400;">2）<strong>立刻</strong>向100 μL的siRNA中加入2-4 μL的轉染試劑，旋渦10秒，充分混勻。</p> <p style="font-weight: 400;">3）在室溫下孵育10 min，使得形成siRNA-PEI陽離子核酸轉染試劑復合物。<br /><strong>【注】：孵育時間不要超過30</strong><strong>min</strong></p> <p style="font-weight: 400;">4）在形成復合物過程中，移除細胞生長培養基，每孔中加入500 μL新鮮預熱的完全培養基。</p> <p style="font-weight: 400;">5）直接將100 µL siRNA-PEI陽離子核酸轉染試劑復合物加入細胞中，搖動培養板，輕輕混勻。最終體積為600 µL ，siRNA終濃度為50 nM。</p> <p style="font-weight: 400;">6）37 ℃，5% CO<sub>2</sub>培養箱培養，直至目的基因表達。建議一般siRNA表達水平通常在24-72 h，蛋白表達水平在48-96 h。</p> <p style="font-weight: 400;"> </p> <p style="font-weight: 400;"><span style="color: #000000;">表1 siRNA終濃度為50 nM時，轉染試劑、培養基的用量參考值（貼壁細胞）</span></p> <table style="width: 100%;" border="1" cellspacing="1"> <tbody> <tr> <td> <p style="font-weight: 400;">培養皿</p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">每孔培養基體積</p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">稀釋用無血清培養基</p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">siRNA物質的量(pmoles)</p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">轉染試劑體積（µL）</p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">加入復合物后培養基總體積</p> </td> </tr> <tr> <td> <p style="font-weight: 400;">96孔板</p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">125 µL</p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">50 µL</p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">8.75</p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">0.5-1.5</p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">175 µL</p> </td> </tr> <tr> <td> <p style="font-weight: 400;">24孔板</p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">500 µL</p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">100 µL</p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">30</p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">2-4</p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">600 µL</p> </td> </tr> <tr> <td> <p style="font-weight: 400;">12孔板</p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">1 mL</p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">200 µL</p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">60</p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">4-8</p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">1.2 mL</p> </td> </tr> <tr> <td> <p style="font-weight: 400;">6孔板</p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">2 mL</p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">200 µL</p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">110</p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">8-16</p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">2.2 mL</p> </td> </tr> <tr> <td> <p style="font-weight: 400;">25cm<sup>2</sup>培養瓶</p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">4 mL</p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">400 µL</p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">220</p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">15-25</p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">4.4 mL</p> </td> </tr> </tbody> </table> <p style="font-weight: 400;">注：貼壁細胞培養密度與各細胞倍增時間有關，確保細胞轉染時細胞密度在60-80%即可。</p> <p style="font-weight: 400;"><strong><span style="color: #000000;">二．懸浮細胞轉染（以24孔板和終濃度50 nM siRNA為例，其他培養板加樣體積請參考</span></strong><strong>表2）</strong><br /><strong><span style="color: #000000;">接種細胞</span></strong></p> <p style="font-weight: 400;">1.為了優化懸浮細胞轉染條件，與貼壁細胞相比，需要降低懸浮細胞培養基的體積。根據培養皿大小和完整培養基的體積，推薦接種懸浮細胞的數量如下表2所示。</p> <p style="font-weight: 400;">表2 siRNA終濃度為50 nM時，轉染試劑、培養基的用量參考值（懸浮細胞）</p> <table style="width: 100%;" border="1" cellspacing="1"> <tbody> <tr> <td> <p style="font-weight: 400;">培養皿</p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">siRNA物質的量(pmoles)</p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">轉染試劑體積（µL）</p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">轉染當天接種細胞數</p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">形成復合物培養基體積</p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">轉染前懸浮細胞的體積</p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">轉染4-6h后另加入培養基的體積</p> </td> </tr> <tr> <td> <p style="font-weight: 400;">96孔板</p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">5</p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">0.5-1.5</p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">1×10<sup>4</sup>~ 2×10<sup>4</sup></p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">50 µL</p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">50 µL</p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">100 µL</p> </td> </tr> <tr> <td> <p style="font-weight: 400;">24孔板</p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">15</p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">2-4</p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">1×10<sup>5</sup> ~ 2×10<sup>5</sup></p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">100 µL</p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">200 µL</p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">700 µL</p> </td> </tr> <tr> <td> <p style="font-weight: 400;">12孔板</p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">35</p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">4-8</p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">2×10<sup>5</sup> ~ 4×10<sup>5</sup></p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">200 µL</p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">500 µL</p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">1 mL</p> </td> </tr> <tr> <td> <p style="font-weight: 400;">6孔板</p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">60</p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">8-16</p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">5×10<sup>5</sup> ~ 2×10<sup>6</sup></p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">200 µL</p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">1 mL</p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">2 mL</p> </td> </tr> <tr> <td> <p style="font-weight: 400;">25cm<sup>2</sup>培養瓶</p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">120</p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">15-25</p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">2×10<sup>6</sup>~ 5×10<sup>6</sup></p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">400 µL</p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">2 mL</p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">4 mL</p> </td> </tr> </tbody> </table> <p style="font-weight: 400; color: #000000;"> </p> <p style="font-weight: 400; color: #000000;">2.按照以下體系配制siRNA-PEI陽離子核酸轉染試劑復合物：<strong> </strong></p> <p style="font-weight: 400; color: #000000;">1）對于每孔細胞，使用100 μL無血清培養基（如OPTI-MEM培養基）稀釋15 pmols siRNA，混勻。</p> <p style="font-weight: 400; color: #000000;">2）向100 μL的siRNA中加入2-4 μL的轉染試劑，<strong>立刻</strong>旋渦10秒，充分混勻。</p> <p style="font-weight: 400; color: #000000;">3）在室溫孵育15 min，使得形成siRNA-PEI陽離子核酸轉染試劑復合物。<br /><strong>【注】：孵育時間不要超過30 </strong><strong>min</strong></p> <p style="font-weight: 400; color: #000000;">4）在每孔200 μL細胞懸浮液中，加入100 μL的siRNA-PEI陽離子核酸轉染試劑復合物，輕輕混勻。最終體積為300 µL，siRNA終濃度為50 nM。</p> <p style="font-weight: 400; color: #000000;">5）37 ℃，5% CO<sub>2</sub>培養箱培養4-6 h后，再加入700 µL完全培養基，輕輕搖動培養板使其混勻。</p> <p style="font-weight: 400; color: #000000;">6）繼續放入培養箱中孵育，直至目的基因表達。建議一般siRNA表達水平通常在24-72 h，蛋白表達水平在48-96 h。</p> <p style="font-weight: 400; color: #000000;"><strong>【注】：為了優化內源性基因沉默，</strong><strong>siRNA濃度</strong><strong>需要做梯度摸索。轉染試劑的體積應根據</strong><strong>siRNA濃度</strong><strong>和培養皿的大小進行調整。</strong><strong> </strong></p> <ul style="color: #000000; font-weight: 400;"> <li><strong><span style="color: #000000;">miRNA轉染操作流程</span></strong><br />該轉染試劑也適合轉染miRNA，轉染貼壁細胞和懸浮細胞的具體操作請參考siRNA的操作流程。</li> </ul>