<h2 style="font-weight: 400; color: #000000;"><strong>產品簡介</strong></h2> <p style="font-weight: 400; color: #000000;">ATP是細胞內最重要的能量分子，可以用來衡量細胞新陳代謝水平，因此可通過ATP含量反應活細胞的數目。ATP生物發光技術的原理是熒光素酶以熒光素、三磷酸腺苷（ATP）和O₂為底物，在Mg²⁺存在時，將化學能轉化為光能，因此在一定范圍內，ATP濃度與發光強度呈正比?；谶@一原理，本試劑盒利用螢火蟲熒光素酶（Firefly luciferase）催化底物&mdash;&mdash;熒光素的轉化，高效利用ATP的能量，發射出光子，發光信號可以反映ATP的量，而ATP的量可以反映細胞數目，從而達到檢測目的。</p> <p style="font-weight: 400; color: #000000;">本試劑盒提供的發光法細胞活力檢測試劑線性范圍廣、靈敏度高、穩定性好：96孔板中，在5個至100000個細胞范圍內，迅速完成檢測，僅需10&nbsp;min；無需洗滌細胞，也無需更換或去除培養液；半衰期長，具有極好的穩定性；相比于其他常見的細胞活力測定方法如Calcein-AM、CCK-8等，也更加簡便快捷。</p> <h2 style="font-weight: 400; color: #000000;"><strong>產品信息</strong></h2> <table style="width: 100%;" border="1" cellspacing="1"> <tbody> <tr> <td> <p style="font-weight: 400;">貨號</p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">C331310E/C230102S/C230102M</p> </td> </tr> <tr> <td> <p style="font-weight: 400;">規格</p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">10 mL /100&nbsp;mL/10&times;100&nbsp;mL</p> </td> </tr> </tbody> </table> <h2 style="font-weight: 400; color: #000000;"><strong>儲存條件</strong></h2> <p style="font-weight: 400; color: #000000;">-25~-15℃儲存，有效期1年。建議分裝保存，避免反復凍融。</p> <h2 style="font-weight: 400; color: #000000;"><strong>注意事項</strong></h2> <ol style="color: #000000; font-weight: 400;"> <li>熒光素酶活性對溫度比較敏感，所以反應前細胞和檢測試劑均需平衡至室溫后再進行測定。請勿室溫存放。</li> <li>檢測試劑請混勻后使用。</li> <li>本試劑盒的檢測試劑中含有熒光素酶，反復凍融會導致其逐漸失活。為取得良好的使用效果，第一次解凍后可適當分裝保存，但需注意分裝的容器不能有ATP污染。</li> <li>待測藥物的溶劑含量較高時可能會干擾熒光素酶反應，從而影響化學發光信號?？梢酝ㄟ^設置含有溶劑的細胞培養液對照孔排除溶劑的干擾。</li> <li>檢測時須使用適合于細胞培養的白色或黑色的96孔板或384孔板。如果使用普通透明的96孔板或 384孔板，相鄰孔之間會產生相互干擾。</li> <li>為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。</li> <li>本產品僅用于科研。</li> </ol> <p style="font-weight: 400; color: #000000;"><strong>使用說明</strong></p> <p style="font-weight: 400; color: #000000;"><strong>1. 細胞培養</strong></p> <p style="font-weight: 400; color: #000000;">使用適合進行化學發光檢測的96孔板，每孔接種100&nbsp;&mu;L細胞（根據培養時間確定初始接種的細胞密度，檢測時每孔細胞數量不宜超5萬個），同時設置不含細胞的培養液的孔作為陰性對照，37℃，5%&nbsp;CO2培養細胞。也可以設置細胞的濃度梯度，以得到最佳的實驗結果。根據需要在合適的時間加藥處理細胞。</p> <p style="font-weight: 400; color: #000000;"><strong>2.（可選）ATP&nbsp;標準曲線的制作</strong></p> <p style="font-weight: 400; color: #000000;">把自備的ATP標準溶液用PBS稀釋成適當的濃度梯度，96孔板每孔加入100&nbsp;&mu;L的標準品。</p> <p style="font-weight: 400; color: #000000;"><strong>3. 細胞活力檢測</strong></p> <p style="font-weight: 400; color: #000000;">1）融解凍存的發光法檢測試劑，并平衡至室溫（請勿在超過25℃以上環境進行融化，避免活性減弱）</p> <p style="font-weight: 400; color: #000000;">2）取出細胞培養板，室溫放置10-20 min，使培養板溫度平衡至室溫。</p> <p style="font-weight: 400; color: #000000;">3）96孔板每孔加入100&nbsp;&mu;L檢測試劑（384孔板每孔25&nbsp;&mu;L&nbsp;) (由于孔的邊緣效應，可能會導致發光信號不穩定，不建議在邊緣鋪板）。</p> <p style="font-weight: 400; color: #000000;">4）室溫振蕩2-5 min，以促進細胞的裂解。</p> <p style="font-weight: 400; color: #000000;">5）不透明封板膜封板，室溫避光放置10 min，使發光信號達到最大。</p> <p style="font-weight: 400; color: #000000;">6）使用多功能酶標儀進行化學發光檢測，檢測波長560 nm。根據儀器要求設置相應的參數，每孔的檢測時間一般為0.25-1 s，具體需根據儀器的檢測靈敏度進行適當的調整。</p> <p style="font-weight: 400; color: #000000;">7）根據化學發光讀數計算細胞的相對活力，或根據ATP標準曲線計算ATP含量從而得出細胞的相對活力。</p> <p style="font-weight: 400; color: #000000;">【注】檢測效果因細胞的種類不同而異，對于一些ATP含量特別高的細胞，在細胞數量達到100000以上可能會出現化學發光讀數繼續升高，但喪失線性關系。</p>