化學遺傳抑制rAAV-nEF1a-fDIO-hM4D(Gi)-EGFP
產品名稱: 化學遺傳抑制rAAV-nEF1a-fDIO-hM4D(Gi)-EGFP
英文名稱: rAAV-nEF1a-fDIO-hM4D(Gi)-EGFP
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rAAV: Recombinant adeno-associated virus, 重組腺相關病毒。以重組腺相關病毒為載體,安全性高(目前還沒有發現rAAV對人體致?。?,免疫原性低(感染后很少被免疫系統所清除),表達時間長。
n Ef1α:Ef1α縮小版,廣譜性啟動子
fDIO或者稱fDiO (Flp controled Double-floxed inverse Orientation),是和Flp配合控制目的基因表達的元件,一般由兩對互不相容的Frt序列組成,特征序列是Frt-間隔1-Frt5-GOIr-Frtr-間隔2-Frt5r。當有Flp存在時,任一對Frt序列都有可能發生重組,因為每對Frt都是相反方向的,所以重組會導致他們之間的序列發生顛倒,例如Frt先發生重組會形成Frt-GOI-Frt5r-間隔1r-Frtr-間隔2-Frt5r,這時兩個Frt5的方向由之前的相反變成相同,它們之間發生第二次重組就會使Ftrr缺失,形成Frt-GOI-Frt5r,由于Frt和Frt5之間不能發生重組,目的基因的位置就固定下來。Frt5先發生重組,結果也是一樣的。通常我們會插入目的基因使它的序列和啟動子相反,也就是剛開始的時候不表達,Cre作用后目的基因開始表達。
hM4D(Gi):hM4D(Gi)是從人毒蕈堿乙酰膽堿受體M4 上改造的僅對CNO(clozapine-N-oxide)有反應的人工受體(designer receptors exclusivelyactivated by designer drugs,DREADD),不再受乙酰膽堿激活。在一些神經元里,CNO 結合hM4D 后,激活Gi 蛋白偶聯的內向鉀離子通道GIRK,使得細胞膜超極化,抑制神經元細胞動作電位發放。在不表達GIRK 或是Gi 的細胞中,hM4D 的功能會有所不同。
