丫啶橙

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　　3，6-(二甲胺基)吖啶鹽酸鹽，分子式C17H19N3 · HCl · ZnCl2, 分子量438.12g/mol,是一種熒光色素，其檢測激發濾光片波長488nm,阻斷 濾光片波長515nm。它與 細胞中DNA和RNA結合量存在差別，可發出不同顏色的 熒光，與DNA結合量少發綠色熒光，與RNA結合量多發桔黃色或桔紅色熒光。該染料具有膜通透性，能透過細胞膜，使核DNA和RNA染色。因此，在熒光顯微鏡下觀察，吖啶橙可透過正常細胞膜，使細胞核呈綠色或黃綠色均勻熒光;而在凋亡細胞中，因染色質固縮或斷裂為大小不等的片斷，形成凋亡小體。吖啶橙使其染上致密濃染的黃綠色熒光，或黃綠色碎片顆粒;而壞死細胞黃熒光減弱甚至消失。吖啶橙 AO常與溴化乙啶EB合用雙染，因EB只染死細胞使之產生桔黃色熒光，由此可區分出正常細胞、凋亡細胞及壞死細胞.它還可以用作移碼突變的誘變劑,能鑲嵌于兩個相鄰的堿基對之間，這樣在DNA復制過程中，會使DNA鏈增加或缺失一個堿基，造成移碼突變。吖啶橙染液有毒，操作時要戴手套，需避光。

簡稱：AO

AO能與無機酸形成鹽，具有綠色熒光。如果再稀釋的話，便水解成游離的AO，而呈現紫色熒光。

吖啶橙/溴化乙錠雙熒光染色測定PC12細胞凋亡(acridine orange/ethidium bromide, AO/EB)：

(1)細胞爬片：在6孔培養板中預先置入玻璃蓋玻片，接種細胞懸液，干預后，予95%乙醇固定15分鐘，微干，然后準備熒光染色。將100mg/L溶于PBS的吖啶橙和100mg/L溶于PBS的溴化乙錠各5μl(臨用前混合加入，加樣量宜小，有時各2μl-5μl足夠，量太大容易形成細胞凋亡的假陽性)，在照相前混勻后加入，輕輕吹打，30秒后用激光共聚焦顯微鏡觀察照相。(有人用15mg吖啶橙溶于100ml pH6.8的PBS中過濾，避光保存)計取5個視野，共100個細胞中凋亡細胞百分數。

(2)如制成細胞懸液：取100μl PBS稀釋的細胞懸液，加2μl的染色液，其中AO/EB，各含100μg/ml，加入染料30秒后觀察攝像。

Acridine Orange 丫啶橙

Acridine Orange 丫啶橙

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