新型冠狀病毒(2019-nCoV)雙熒光qRT-PCR試劑盒-PCR/RT-PCR/qPCR-試劑-生物在線

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新型冠狀病毒(2019-nCoV)雙熒光qRT-PCR試劑盒

新型冠狀病毒(2019-nCoV)雙熒光qRT-PCR試劑盒

商家詢價

產(chǎn)品名稱： 新型冠狀病毒(2019-nCoV)雙熒光qRT-PCR試劑盒

英文名稱： Novel Coronavirus (2019-nCoV) Dual Probes qRT-PCR

產(chǎn)品編號： D8006S

產(chǎn)品價格： 0

產(chǎn)品產(chǎn)地： 上海

品牌商標(biāo)： 雅吉

更新時間： null

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新型冠狀病毒(2019-nCoV)雙熒光qRT-PCR試劑盒，即Novel Coronavirus (2019-nCoV) Dual Probes qRT-PCR Kit，是基于ORF1ab基因和N基因的雙熒光探針的用于新型冠狀病毒(2019-nCoV/SARS-CoV-2)核酸檢測的試劑盒。本試劑盒經(jīng)過假病毒驗(yàn)證，可以免RNA抽提而直接用于RNA病毒樣品的檢測，使用非常便捷。

2019年底由新型冠狀病毒引起的肺炎疫情，從2020年初開始在全球大流行，感染病例快速上升，引發(fā)全球關(guān)注。該病毒被世界衛(wèi)生組織(WHO)命名為2019-nCoV，被國際病毒分類委員會命名為嚴(yán)重急性呼吸綜合征冠狀病毒2 (severe acute respiratory syndrome coronavirus 2, SARS-CoV-2)。由新型冠狀病毒導(dǎo)致的疾病，被世界衛(wèi)生組織正式命名為冠狀病毒疾病2019 (Corona Virus Disease 2019, COVID-19），通常稱為新型冠狀病毒肺炎，簡稱“新冠肺炎”。
冠狀病毒是一個大型病毒家族，已知可引起感冒以及中東呼吸綜合征(MERS)、嚴(yán)重急性呼吸綜合征(SARS)等較嚴(yán)重疾病以及新冠肺炎COVID-19。新型冠狀病毒是以前從未在人體中發(fā)現(xiàn)的冠狀病毒新毒株。
本試劑盒以新型冠狀病毒ORF1ab基因和N基因中的保守區(qū)為靶點(diǎn)，參考中國疾病預(yù)防控制中心提供的新型冠狀病毒核酸檢測引物和探針序列，并經(jīng)過優(yōu)化而研發(fā)的新型冠狀毒核酸檢測試劑盒。每條檢測探針的5端標(biāo)記FAM或VIC熒光基團(tuán)，3端標(biāo)記TAMRA或BHQ1淬滅基團(tuán)。擴(kuò)增之前探針上的淬滅基團(tuán)由于空間上的熒光共振能力轉(zhuǎn)移(FRET)而導(dǎo)致熒光基團(tuán)淬滅。PCR反應(yīng)時，引物和探針都會退火到目標(biāo)基因上，隨著引物的延伸，Taq酶的5→3外切酶活性會導(dǎo)致結(jié)合在目標(biāo)基因上的探針從5端開始逐漸被降解。探針的熒光基團(tuán)和淬滅基團(tuán)被Taq酶切開后，淬滅基團(tuán)的作用消失，熒光基團(tuán)就能正常地被激發(fā)光所激發(fā)而產(chǎn)生熒光。每經(jīng)過一個PCR循環(huán)，就會有更多的熒光基團(tuán)被釋放，熒光強(qiáng)度與新合成的目標(biāo)片段數(shù)量成正比，熒光定量PCR儀可根據(jù)檢測到的熒光信號繪制出實(shí)時擴(kuò)增曲線，從而實(shí)現(xiàn)對新冠狀病毒(2019-nCoV)在核酸水平上的檢測。
本試劑盒包含了BeyoRT? M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶、BeyoFast? Taq DNA Polymerase、引物、探針、PCR Buffer、dNTPs、穩(wěn)定劑、Nuclease-free Water和鎂離子等所有的通用組分，操作更簡單、使用便捷，用戶只需自備樣品RNA即可。本試劑盒的檢測下限為500-1000 copies/ml。本試劑盒用于陽性質(zhì)粒檢測的平均Ct值見下表，檢測效果參考圖1。
Target 100pg 10pg 1pg 0.1pg 0.01pg 0pg
N-FAM 13.28 16.73 20.02 23.36 26.85 Undetermined
ORF1ab-VIC 13.12 16.41 19.82 23.17 26.73 Undetermined


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圖1.新型冠狀病毒(2019-nCoV)雙熒光qRT-PCR試劑盒用于陽性質(zhì)粒的檢測效果圖。將本試劑盒中的Novel CoV (2019-nCoV) Positive control稀釋至每反應(yīng)中的每個質(zhì)粒量分別為100、10、1、0. 1、0.01pg，然后用本試劑盒進(jìn)行雙熒光qRT-PCR檢測。由于陽性質(zhì)粒是超螺旋的，其檢測靈敏度遠(yuǎn)低于線性化的質(zhì)粒，不能直接用超螺旋質(zhì)粒的檢測靈敏度去計算檢測下限。實(shí)測數(shù)據(jù)可能會因樣品、檢測儀器等的不同而存在差異，圖中數(shù)據(jù)僅供參考。
本試劑盒適用于具有FAM和VIC/HEX/JOE檢測通道的熒光定量PCR儀，如ABI的7500、7900、StepOne、QuantStudio系列，Roche的LightCycler480、SmartCycler，Bio-Rad的CFX96、Chromo4、Opticon 2、iCycler IQ、iQ5，Qiagen的Rotor Gene 6000，上海宏石SLAN-96P等。
本試劑盒經(jīng)假病毒驗(yàn)證，可以免RNA抽提而直接用于病毒的核酸檢測。本試劑盒經(jīng)過優(yōu)化，對含咽拭子、唾液的常規(guī)病毒保存液有較好的兼容性；同時，本試劑盒經(jīng)假病毒模擬咽拭子、唾液樣品驗(yàn)證，可以適用于保存于病毒保存液中的RNA病毒樣品的直接檢測，無須進(jìn)行RNA的抽提，使用非常便捷，相關(guān)結(jié)果參考下表。不同數(shù)量的新冠病毒N基因慢病毒保存在含咽拭子的TE溶液中，RNAeasy?病毒RNA抽提試劑盒(離心柱式) (R0035S/M/L)提取病毒后或未經(jīng)抽提直接使用本試劑盒進(jìn)行qRT-PCR檢測。此處的病毒量是指每個PCR反應(yīng)體系中病毒的IU (Infection Unit)數(shù)。注：實(shí)際操作時，須根據(jù)病毒樣本的來源、保存液類型進(jìn)行一定的驗(yàn)證測試。IU數(shù)為具有生物活性的病毒顆粒數(shù)，實(shí)際病毒的拷貝數(shù)可能是IU數(shù)的10-1000倍。
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樣本處理方式 病毒RNA抽提試劑盒提取 直接法
病毒量(IU) 400 40 4 400 40 4
Ct值 復(fù)孔1 24.58 27.93 32.19 25.39 28.97 32.04
復(fù)孔2 25.07 28.27 31.58 25.12 28.68 31.00
復(fù)孔3 25.21 28.05 31.73 25.13 28.90 31.31
平均值 24.95 28.09 31.84 25.21 28.85 31.45

如果用于常規(guī)的96孔板qRT-PCR檢測(建議反應(yīng)體系為25μl)，本產(chǎn)品小包裝D8006S可以進(jìn)行100次檢測，中包裝D8006M可進(jìn)行500次檢測；如果用于常規(guī)的384孔板qRT-PCR檢測(建議反應(yīng)體系為10μl)，本產(chǎn)品小包裝D8006S可以進(jìn)行250次檢測，中包裝D8006M可進(jìn)行1250次檢測。

包裝清單：
產(chǎn)品編號 產(chǎn)品名稱 包裝
D8006S-1 Enzyme Mix 250μl
D8006S-2 Reaction Buffer 2ml
D8006S-3 Novel CoV (2019-nCoV) Negative control 200μl
D8006S-4 Novel CoV (2019-nCoV) Positive control 200μl
－ 說明書 1份

產(chǎn)品編號 產(chǎn)品名稱 包裝
D8006M-1 Enzyme Mix 1.25ml
D8006M-2 Reaction Buffer 10ml
D8006M-3 Novel CoV (2019-nCoV) Negative control 1ml
D8006M-4 Novel CoV (2019-nCoV) Positive control 1ml
－ 說明書 1份
保存條件：

-20℃避光保存，一年有效。盡量避免反復(fù)凍融。

注意事項(xiàng)：

本試劑盒并非臨床診斷檢測試劑盒，檢測結(jié)果僅供科學(xué)研究用途，不得作為臨床診斷的依據(jù)。但感興趣的用戶可以與我司合作，使用本試劑盒作為原料，研發(fā)和申報相應(yīng)的臨床診斷檢測試劑盒。

樣本的采集、保存及運(yùn)輸條件等都可能影響檢測結(jié)果，其中任何環(huán)節(jié)失誤或污染都會導(dǎo)致假陰性或假陽性結(jié)果。

本試劑盒檢測的靶序列為新型冠狀病毒(2019-nCoV) ORF1ab基因和N基因的保守區(qū)域。但如果病毒在靶序列處發(fā)生基因突變，則可能出現(xiàn)假陰性結(jié)果。

樣本滅活(如56℃、45分鐘)很可能會使檢測結(jié)果的Ct值增加1-2。

Enzyme Mix含有高濃度甘油，粘度高，使用前須將所有液體短暫離心至管底，然后緩慢準(zhǔn)確吸取。

使用前須確保Reaction Buffer完全融化，并且上下顛倒混勻至少3次后使用。

經(jīng)測試，本產(chǎn)品反復(fù)凍融10次對使用效果無顯著影響。但仍需盡量避免反復(fù)凍融本產(chǎn)品，反復(fù)凍融可能使產(chǎn)品性能下降。

qPCR檢測是超高靈敏度的檢測，盡量在標(biāo)準(zhǔn)的PCR實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行檢測。PCR反應(yīng)設(shè)置區(qū)域須盡量避免各種可能的擴(kuò)增產(chǎn)物的污染。請勿撕開PCR封板膜或PCR管蓋，PCR產(chǎn)物宜密封后按擴(kuò)增后產(chǎn)物要求處理，以避免超高濃度的PCR產(chǎn)物污染實(shí)驗(yàn)環(huán)境。

本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。

為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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