實驗原理

? ? ???穩定轉染就是將外源基因DNA整合到宿主細胞染色體上，使宿主細胞可長期表達目的基因及蛋白。需要在瞬時轉染基礎上對靶細胞進行篩選或者應用高轉染效率的病毒，根據不同基因載體中所含有的抗性標志選用相應的藥物進行細胞傳代，從而得到可穩定表達目的基因的細胞系。?

? ? ? ?瞬時轉染/感染的特點：外源DNA不整合到宿主的染色體中，一個宿主細胞中可以存在多個拷貝數，產生短時間內的高水平的表達(只能持續幾天)；外源基因的表達水平不存在整合位點的問題，不會受到周圍染色體元件的影響；瞬時轉染所需的人力和時間比穩轉少，但DNA攝入效率和表達水平在不同實驗中差異較大，因此表達不長久也不穩定。

? ? ??穩轉細胞株的特點：經合適的藥物濃度進行藥物篩選后，可得到外源DNA整合到宿主染色體的細胞，這些細胞可以長時間表達外源目的基因，穩定表達細胞株彌補了瞬時感染(或轉染)實驗中外源基因表達時間短的缺陷，便于長期觀察。穩轉細胞的篩選需根據不同基因載體中所含有的抗性標志選用相應的藥物，常用的抗性篩選有嘌呤霉素(puromycin)、潮霉素(hygromycin)、新霉素(neomycin)、滅稻瘟素(Blasticidin)等。若實驗需求構建穩轉細胞株，我們建議通過慢病毒感染細胞進行藥物篩選的方法，此方法較質粒轉染可以更加有效的將外源基因整合入基因組，且整合位點處于轉錄相對活躍的區域，從而獲得更加高效表達外源基因的穩轉株細胞。

? ? ? ?舍為斯生物具有豐富的穩轉細胞系構建經驗，可為客戶提供懸浮細胞/貼壁細胞的過表達/干擾基因多克隆/單克隆穩轉細胞系構建服務。

技術應用

如秩序要觀察外源基因表達后較短時間內就能檢測的細胞功能，可使用瞬時轉染/感染。即在轉染后24至96小時內收獲細胞；如需要長期觀察外源基因表達的作用，進行長期藥理學研究、基因治療研究、遺傳調控機制研究或需要進行大規模蛋白合成則需要構建穩轉株。