畢赤酵母蛋白表達(dá)及純化服務(wù)
產(chǎn)品名稱： 畢赤酵母蛋白表達(dá)及純化服務(wù)
英文名稱： P. pastoris
產(chǎn)品編號(hào)： GM-PE-03
產(chǎn)品價(jià)格： 0
產(chǎn)品產(chǎn)地： null
品牌商標(biāo)： null
更新時(shí)間： null
使用范圍： null
- 聯(lián)系人 : 吳經(jīng)理
- 地址 : 上海市浦東新區(qū)康威路299號(hào)東區(qū)1幢5層
- 郵編 :
- 所在區(qū)域 : 上海
- 電話 : 131****9830 點(diǎn)擊查看
- 傳真 : 點(diǎn)擊查看
- 郵箱 : c.wu@genomeditech.com
畢赤酵母作為表達(dá)宿主既具有原核生物繁殖快，易于培養(yǎng)，培養(yǎng)基廉價(jià)和實(shí)驗(yàn)過(guò)程簡(jiǎn)單可行等特點(diǎn)，又具有真核表達(dá)系統(tǒng)所具有的強(qiáng)有力的啟動(dòng)子，還可以對(duì)外源蛋白進(jìn)行加工折疊和翻譯后修飾，具備了典型的真核生物表達(dá)體系的特點(diǎn)。我們的酵母蛋白表達(dá)系統(tǒng)集高產(chǎn)量、高效率和類似哺乳動(dòng)物表達(dá)系統(tǒng)的特點(diǎn)為一體，蛋白表達(dá)持久、穩(wěn)定。
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服務(wù)內(nèi)容
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服務(wù)步驟 |
主要內(nèi)容 |
交付內(nèi)容 |
交付時(shí)間 ? |
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目的基因全基因合成 |
1. 從GenBank中尋找目的蛋白的cDNA序列。 2. 根據(jù)選用的表達(dá)系統(tǒng)對(duì)cDNA進(jìn)行密碼子及mRNA二級(jí)結(jié)構(gòu)的優(yōu)化。 3. 合成設(shè)計(jì)好的基因序列。 |
目的基因（連接在T載體或其它常規(guī)克隆載體上）及測(cè)序報(bào)告。 |
2周 ? ? |
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目的基因亞克隆 |
1. 培養(yǎng)并抽提含有目的基因的載體質(zhì)粒。 2. 將目的基因亞克隆到合適的表達(dá)質(zhì)粒上。 3. 測(cè)序驗(yàn)證構(gòu)建質(zhì)粒的準(zhǔn)確性。 4. 可提供表達(dá)載體（PET系列為主）。 |
正確構(gòu)建的重組表達(dá)質(zhì)粒，含重組質(zhì)粒的DH5α菌株及測(cè)序報(bào)告。 |
2-3周 ? |
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畢赤酵母表達(dá)菌株電轉(zhuǎn)化 |
1. 酶切線性化表達(dá)質(zhì)粒。 2. 將表達(dá)質(zhì)粒通過(guò)電轉(zhuǎn)化到高效的畢赤酵母表達(dá)菌株中。 3. 通過(guò)PCR鑒定至少挑選5個(gè)陽(yáng)性克隆。 4.可提供表達(dá)菌株：X33，GS115，KM71和SMD1168。 |
PCR陽(yáng)性克隆及PCR結(jié)果報(bào)告 |
2周 ? |
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畢赤酵母表達(dá)菌株篩選 |
1. 將5個(gè)陽(yáng)性克隆于BMGY培養(yǎng)基中擴(kuò)增，然后換至BMMY培養(yǎng)基中，并加入甲醇誘導(dǎo)表達(dá)目的蛋白。 2. SDS-PAGE電泳檢測(cè)培養(yǎng)上清中目的蛋白的表達(dá)情況，并挑選合適的單克隆菌株用于目的蛋白的表達(dá) 3. 如果培養(yǎng)上清中檢測(cè)不到表達(dá)，則通過(guò)將上清濃縮20倍作用再檢測(cè)，或通過(guò)Western-blot方法檢測(cè)目的蛋白表達(dá)（客戶需要提供相關(guān)抗體）。 |
陽(yáng)性克隆菌株及表達(dá)篩選結(jié)果報(bào)告。 |
2周 ? |
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畢赤酵母表達(dá)菌株表達(dá)優(yōu)化 |
1. 挑選20個(gè)陽(yáng)性克隆進(jìn)行常規(guī)表達(dá)篩選，并對(duì)其中表達(dá)最好菌株優(yōu)化表達(dá)條件。 2. 對(duì)挑選出來(lái)的單克隆菌株，優(yōu)化培養(yǎng)及誘導(dǎo)條件（培養(yǎng)基，菌體密度，甲醇濃度，誘導(dǎo)時(shí)間等），提高目的蛋白的表達(dá)量。 |
三個(gè)陽(yáng)性克隆菌株及優(yōu)化表達(dá)條件結(jié)果報(bào)告。 |
2周 ? |
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目的蛋白表達(dá)及純化 |
1. 搖瓶培養(yǎng)1L重組酵母菌，誘導(dǎo)表達(dá)目的蛋白。. 2. 通過(guò)親和，離子交換，疏水及凝膠過(guò)濾等多種層析方法純化表達(dá)的重組蛋白。 3. 通過(guò)SDS-PAGE電泳檢測(cè)每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量。 4. 通過(guò)Western-blot驗(yàn)證目標(biāo)蛋白正確性。 |
純化好的目的蛋白1~10mg及純化報(bào)告。可按客戶要求提供含純化標(biāo)簽（Tag）或切除純化標(biāo)簽（Tag）的最終蛋白，純度可達(dá)80%以上。 |
2-3周 ? |
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目的蛋白的再加工及詳細(xì)檢測(cè) |
1. 內(nèi)毒素去除，除菌，凍干等進(jìn)一步加工。 2. 通過(guò)HPLC，質(zhì)譜等方法詳細(xì)檢測(cè)目的蛋白的質(zhì)量。 |
加工后的終產(chǎn)品及相關(guān)實(shí)驗(yàn)和檢測(cè)報(bào)告 |
2周 ? |
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大規(guī)模制備 |
按照小試工藝放大生產(chǎn)規(guī)模，制備客戶需要的合格蛋白產(chǎn)品。 |
合格的目的蛋白及服務(wù)報(bào)告 |
協(xié)商 ? |
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