Trizol 使用說明書

本產品僅限于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥
品。
一、分離純化的基本原理
研究基因的表達和調控時常常要從組織和細胞中分離和純化 RNA。RNA 質量的高低常常影響
cDNA 庫，RT-PCR 和 Northern Blot 等分子生物學實驗的成敗。Trizol 是一種新型總 RNA 抽提試
劑，內含異硫氰酸胍等物質，能迅速破碎細胞，抑制細胞釋放出的核酸酶。
二、用戶需自備的試劑和材料
無水乙醇、氯仿、Glycogen（可能需要）、 1.5ml Eppendorf 管（RNase-free）、 Tips
（RNase-free）
三、準備工作
RNase 酶非常穩定，是導致 RNA 降解最主要的物質。它在一些極端的條件可以暫時失活，但
限制因素去除后有迅速復性。用常規的高溫高壓蒸氣滅菌方法和蛋白抑制劑都不能是 RNase 完全
失活。它廣泛存在于人的皮膚上，因此，在與 RNA 制備有關的分子生物學實驗時，必須戴手套。
RNase 的又一污染源是取液器，根據取液器制造商的要求對取液器進行處理。一般情況下采用用
DEPC 配制的 70%乙醇擦洗取液器的內部和外部，基本達到要求。取 RNase-free 的物品時必須戴
手套。
1、 料制品的處理
盡可能使用無菌，一次性塑料制品，已標明 RNase-Free 的塑料制品，如沒有開封使用過通
常沒有必要再次處理。對于國產塑料制品，原則上都必須處理方可使用。處理步驟如下：
1）在玻璃燒杯中注入去離子水，加入 DEPC 使 DEPC 的終濃度為 0.1%。注意：DEPC 為劇毒物，活性很強，小心在通風柜中使用。
2）處理的塑料制品放入一個可以高溫滅菌的容器中，注入 DEPC 水溶液，使塑料制品的所有部分
都浸泡到溶液中。
3）在通風柜中室溫處理過夜。
4）將 DEPC 水溶液小心倒到廢液瓶中，用鋁箔封住含已 DEPC 水處理過的塑料制品的燒杯，高溫
高壓蒸氣滅菌至少 30 分鐘。
5）烘箱用合適的溫度烘拷至干燥。置于干凈處備用。
2、 璃玻和金屬物品250°C 烘烤 3 小時以上。

四、從組織中提取總 RNA
1)液氮研磨，組織塊直接放入研缽中，加入少量液氮，迅速研磨，待組織變軟，再加少量液氮，
再研磨，如此三次，按 50-100mg 組織/ml Trizol 加入 Trizol，轉入離心管進行第 2 步操作。
2) 勻漿：組織樣品按 50-100mg/mlTrizol 加入 Trizol。另外，組織體積不能超過 Trizol 體積
的 10%，否則勻漿效果會不好，用電動勻漿器充分勻漿約需 1-2 分鐘。
五、從細胞中提取總 RNA
1) 培養貼壁細胞：不須消化，可直接用Trizol進行消化、裂解，Trizol體積按 10cm2
/ml比例加入。
2) 懸浮細胞可直接收集、裂解，每 1ml Trizol可裂解 5×106動物、植物或酵母細胞，或 10
7細菌細胞。