LBA4404農桿菌感受態細胞

保存條件：-80℃。

1.? 產品簡介：

基 因 型Ach5 (rif R) Ti pAL4404 (strepR) Octopine

LBA4404菌株為Ach5型背景，核基因中含有篩選標簽——利福平抗性基因rif，為了便于轉化操作，此菌株攜帶一無自身轉運功能的章魚堿型Ti質粒pAL4404，此質粒含有vir基因（vir基因是T-DNA插入植物基因組必需的元件，pAL4404質粒自身的T-DNA轉移功能被破壞，但可以幫助轉入的雙元載體TDNA

順利轉移）。pAL4404型Ti質粒含有篩選標簽：strep，賦予LBA4404菌株鏈霉素抗性，適用于菸草、番茄、煙草等植物的轉基因操作，經pCAMBIA2301質粒檢測轉化效率可達104cfu/μg。

2.使用說明：

1．取100 μl感受態細胞置于冰浴中融化。

2．待感受態細胞融化后，向感受態細胞懸液中加入目的DNA（根據實際情況加入適量的DNA，通常100 μl感受態細胞能夠被1 ng超螺旋質粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，靜置冰浴30min。
3．42℃熱擊45sec，然后快速將離心管轉移到冰浴中靜置2-3min，該過程不要搖動離心管。
4．每個離心管中加入450 μl無菌的SOC或LB培養基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床， 150 rpm振蕩培養45～60min使菌體復蘇。
5．根據實驗需求，取適量已轉化的感受態細胞，加到含相應抗生素的SOC或LB固體瓊脂培養基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養，37℃培養12~16h。

3.注意事項：

1．感受態細胞最好在冰中緩慢融化，8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。

2．混入質?；蜻B接產物時應輕柔操作。

3．轉化高濃度的質粒或高效率的連接產物可相應減少最終用于涂板的菌量。

?

*本試劑僅供實驗室研究使用