產品簡介

Cyanine 5（Cy5），是花青素熒光素染料家族的成員之一，是化學合成的聚甲炔染料。目前Cyanine系列染料以兩種異構體的形式供貨，一種是非磺化花青素（non-sulfonated cyanines），一種是磺化花青素（sulfonated cyanine）。兩者的光譜性質幾乎一致，因此大部分應用可相互替換，比如，都可用于標記DNA或蛋白等生物分子。兩者的主要區別在于：磺化染料是水溶性的，在水相的標記反應體系內不需要使用有機共溶劑，并且降低染料在水中聚集的可能性，增強標記效率。

本Cyanine 5（Cy5）是以磺化染料的形式供貨，易溶于水，Ex=649 nm，Em=670 nm，具有明亮熒光，光穩定性強，pH非敏感性等優點，適用于標記多肽、蛋白以及核酸等生物分子，以通過后續熒光成像以及其他熒光生物學方法分析目的蛋白。

本Cy5 NHS ester，即含N-羥基琥珀酰亞胺（N-Hydroxysuccinimide）活化基團的Cy5，可直接與生化分子上的氨基（-NH2）反應形成穩定的酰胺鍵，主要是伯胺。

產品信息

產品性質

儲存條件

-15~-25℃干燥避光保存，有效期1年。

使用方法

以下實驗方法僅供參考，請客戶根據文獻進行調整。

1. 準備蛋白儲備液（Solution A）

將100 µL的反應緩沖液（例如，1 M碳酸鈉溶液或1 M PBS緩沖液，pH 9.0）與900 µL的目標蛋白質溶液（例如，抗體。若蛋白質濃度>2 mg/mL可達到更好的效果）混合，得到1 mL的蛋白質標記儲備溶液。
注意：蛋白質溶液（Solution A）的pH值應為8.5±0.5。如果蛋白質溶液的pH值低于8.0，使用1 M碳酸氫鈉溶液或1 M pH 9.0磷酸鹽緩沖液將pH值調整到8.0-9.0的范圍。如果蛋白質溶解在Tris或甘氨酸緩沖液中，則必須在1×PBS（pH 7.2-7.4）中透析，去除用于蛋白質沉淀的游離胺或銨鹽（如硫酸銨和醋酸銨）。若含有牛血清白蛋白（BSA）或明膠等物質，抗體將無法很好地標記。鈉疊氮化物或硫柳汞的存在也可能干擾結合反應。可以通過透析等方式去除鈉疊氮化物或硫柳汞，以獲得最佳的標記結果。如果蛋白質濃度低于2 mg/mL，結合效率會顯著降低。為了獲得最佳的標記效率，建議最終蛋白質濃度范圍為2-10 mg/mL。

1. 準備Cy5 NHS Ester儲備液（Solution B）

將無水DMSO加入到Cy5 NHS Ester小瓶中，制成10 mM的儲備溶液。通過移液器或渦旋混合均勻。

注意：Cy5 NHS Ester儲備液盡量現配現用。儲備液配置完成請盡快使用。儲備液的長期儲存可能會降低染料活性。Solution B可以在避光和防潮的情況下在冰箱中儲存兩周。避免反復凍融循環。

3. 將Solution B（染料）和Solution A（蛋白質）以10：1的摩爾比混合。如Solution B為10 mM，將5 µL的Solution B加入到含有95 µL Solution A的瓶中，并搖動混合。注意：可根據客戶使用情況對儲備液的比例進行調整。

4. 在室溫下繼續旋轉或搖動反應混合物30-60分鐘。

5. 將反應混合物上樣到 1.5 mL Sephadex G-25 柱上，并通過離心洗脫Cy5染料結合的蛋白。

注意事項

1. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

2. 本產品僅作科研用途！

Ver.CN20250319