細胞介紹

該細胞由Gazdar AF及其同事于1979年從一名小細胞肺癌患者的骨髓轉移灶中分離建立（也稱為 H-209），該骨髓標本的獲取先于患者的治療。該細胞是一種典型的小細胞性肺癌細胞，表達較高水平的4種生化標志：神經特異性烯醇、肌酸激酶腦型同工酶、左旋多巴脫羧酶、鈴蟾肽樣免疫活性。c-myc DNA序列沒有擴增；未發現大的結構DNA的異常；該細胞合成與正常肺相當量的p53 mRNA。該細胞以聚集體的形式懸浮生長，只有聚集體中的細胞是有活力的，但是細胞活率無法估計，一般培養基中含有大量的細胞碎片。

細胞特性

1） 來源：男 小細胞肺癌患者的骨髓中提取。

2） 形態：球形成聚集體，懸浮生長，有少數細胞疏松貼壁

3） 含量：>1x106 細胞數

4） 規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5）用途：僅供科研使用。

運輸和保存

干冰運輸及復蘇好存活細胞

（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇，若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯系。

（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

細胞接收后的處理

1） 收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯系我們。

2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態的依據。

3） 懸浮細胞：T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養基和細胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到新的培養瓶中（加入按照說明書細胞培養條件新配制的完全培養基）。

4）備注：運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的完全培養基來培養細胞。  收到細胞后第一次傳代建議T25培養瓶1：2傳代 。                      

一．培養基及培養凍存條件準備

1） 準備RPMI-1640（推薦iCell-0002）培養基；優質胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。

二． 細胞處理：

1） 凍存細胞的復蘇：

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養基的培養瓶（或皿）中37℃培養過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

懸浮狀態下生長的細胞，可以通過向培養瓶中添加完全培養基來維持細胞的生長狀態，一般情況下細胞密度維持在1×105~1×106個/mL（不同細胞對密度要求不同，）可以維持細胞的正常生長。如需分瓶可以將細胞懸液收集到離心管中1000rpm，離心5min，棄去上清，補加1-2mL培養液后重懸混勻后將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長活力，后續傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。

3） 細胞凍存: 收到細胞后建議在培養前3代時凍存一批細胞種子以備后續實驗使用。

下面T25瓶為例；

1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數板計數，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10^6~1×10^7個活細胞/ml.

2. 1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1ml凍存液含1×10^6~1×10^7個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數、日期等信息。

將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續查閱和使用。