北京索萊寶科技有限公司 ?張凈花 ?13426459985
BC3270 ?線粒體分離和線粒體酶提取試劑盒

    

        

            

            

            

            
差速離心法 ? 50 管/48 樣

            
正式測定前務必取2-3 個預期差異較大的樣本做預測定
            
測定意義
            
線粒體是半自主性細胞器，不僅是細胞內氧化磷酸化和合成三磷酸腺苷（ATP）的主要場所，
            
為細胞的活動提供能量，而且在許多生命活動中具有重要調控作用。因此，準確和全面分離
            
保持正?；钚缘木€粒體已經成為許多研究的前提。
            
原理
            
利用專門試劑溫和勻漿組織和細胞，再采用差速離心法從勻漿中分離完整線粒體；利用專門
            
試劑，配合超聲波破碎線粒體，可以得到保持活性的線粒體酶。
            
需自備的儀器和用品
            
超聲波破碎儀、臺式離心機、可調式移液器、研缽、冰和蒸餾水。
            
試劑的組成和配制

            
            
試劑一：50mL×1 瓶，-20℃保存；
            
試劑二：10mL×1 瓶，-20℃保存；
            
試劑三：10mL×1 瓶，-20℃保存；
            試劑四：1mL×1 支，-20℃保存；

            
            
提取步驟
            
1、 準確稱取約0.1g 組織或收集約500 萬細胞，加入1mL 試劑一和10uL 試劑四，用冰浴
            
勻漿器或研缽研磨。
            
2、 4 ℃ 600 g 離心5min。
            
3、 棄沉淀，將上清液移至另一離心管中，4 ℃ 11000 g 離心10min。
            
4、 上清液即胞漿提取物，可用于研究線粒體蛋白向胞漿的釋放。
            
5、 沉淀為完整線粒體。含有完整的內膜和外膜，并具有線粒體的生理功能。可用于線粒體
            
的生理功能等方面的研究。
            
6、 在沉淀中加入200uL 試劑二和2uL 試劑四，超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，
            
超聲3 秒，間隔10 秒，重復30 次），可用于線粒體酶活性測定。
            
7、 在沉淀中加入200uL 試劑三和2uL 試劑四，超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，
            超聲3 秒，間隔10 秒，重復30 次），可用于線粒體蛋白濃度測定。?

            
            
注意事項
            
1、 分離線粒體和提取線粒體蛋白質的所有步驟均需在冰上或4℃進行，所用溶液需冰浴或
            
4℃預冷。
            
2、 通常在分離線粒體時前后兩次離心速度選取600g 和11,000g，如果希望純度更高，但對
            
線粒體的得率要求不高，前后兩次離心速度可以采用1000g 和3500g。
            3、 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。?