??????????????????????????人單核細胞白血病細胞

(THP-1)

細胞介紹

該細胞對乳汁珠和激活的紅細胞有吞噬作用，無表面和胞質免疫球蛋白。可以用佛波醇?TPA誘導單核細胞分化。

細胞特性

1）?來源：急性單核細胞白血病，單核細胞

2）?形態：單核細胞，懸浮

3）?含量：>1x10^6?細胞數

4）?規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)??用途：僅供科研使用。

運輸和保存：干冰運輸及復蘇好存活細胞：（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇，若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯系。（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

細胞接收后的處理：

1） 收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯系我們。?

2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態的依據。

3）?懸浮細胞：T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養基和細胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到新的培養瓶中（加入按照說明書細胞培養條件新配制的完全培養基）。

4）備注：運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的完全培養基來培養細胞。??收到細胞后第一次傳代建議T25培養瓶1：2傳代 。

一．培養基及培養凍存條件準備：

1）?準備RPMI-1640（推薦iCell-0002）培養基；優質胎牛血清，10%；0.05 mM?β－巰基乙醇(細胞培養級 推薦：iCell-8211)；雙抗，1%。

2）?參考傳代比例：傳代時控制細胞密度在2-4?×10⁵cell / mL，并在細胞生長至8-10?×10⁵cell / mL時進行傳代。

3）?參考換液頻率：傳代時換液

4）?培養條件：?氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。

5）?凍存液：完全培養液95%，DMSO 5%（使用該凍存液后，按照我庫的經驗復蘇存活率約50%，復蘇后需要額外培養7-10天才能恢復生長）

6）?【注意事項】：

該細胞為懸浮細胞，根據培養經驗以及客戶的反饋，傳代時使用【半換液法】對細胞狀態較為有利，因此我庫建議您使用【半換液法】進行傳代。

1.?您在收到我們提供的用15ml離心管發貨的細胞后，請不要通過離心的方式收集細胞，可以先準備兩個新的T25培養瓶，然后將細胞混合均勻后移入兩個新的T25培養瓶中，補加培養基到10ml。放入到37℃培養箱中。

2.?您在收到的是用T25培養瓶發貨的細胞，請先通過離心的方式收集細胞，然后將細胞重懸加入12ml按照說明書要求配置的完全培養基吹打均勻后移入兩個新的T25培養瓶中培養即可。

3.?thp-1懸浮細胞。該細胞在培養時更喜歡溫和處理，培養時盡量少對細胞進行離心處理以此造成對細胞的傷害。換液時不要全培養基更換，建議您使用【半換液法】進行傳代，添加細胞培養基以稀釋細胞至維持密度即可。

4.?細胞對血清質量較為敏感，我庫建議您使用進口大品牌優質血清進行培養。FBS不要滅活，如果細胞生長緩慢請嘗試使用其他FBS或暫時將FBS濃度增加到20%

5.該細胞的培養液中需添加β-巰基乙醇（細胞培養級別），若不添加，可能會對細胞狀態造成影響。

β-巰基乙醇的穩定性有限，不可將β-巰基乙醇添加到完全培養基中長期儲存，在每次傳代或液體添加時再添加β-巰基乙醇。

β-巰基乙醇（2-巰基乙醇）被添加到淋巴細胞或其他細胞培養物中，因為在培養基中使用的FBS中氨基酸半胱氨酸供不應求，而胱氨酸則很多。有些細胞（例如T細胞）無法將半胱氨酸轉運到細胞質中，必須將其轉化為半胱氨酸。β-巰基乙醇將胱氨酸還原為可被細胞轉運的形式，然后轉化為細胞生長所需的半胱氨酸。 ?β-巰基乙醇還是一種還原劑，可以分解培養中細胞產生的許多有毒代謝產物，從而改善細胞周圍的環境。

6.該細胞對細胞密度較為敏感，培養、傳代時請注意保持細胞密度在合適的范圍（具體請參考細胞說明書）。

7..該細胞凍存后復蘇率較低，凍存時請酌情提高細胞量

8.通常情況下可以通過向正在生長的細胞中添加完全培養基來維持細胞的生長，每7天可以將細胞離心并重懸于新配的培養基中，來完成細胞的全換液。

ATCC有關thp-1細胞保持細胞活力的說明

https://www.atcc.org/support/faqs/2ed94/Seeding%20density%20for%20TIB-202.aspx?device=modal

（頻繁的細胞計數是監測thp-1的最佳方法。這些細胞應該每2至3天通過向燒瓶中簡單加入少量新鮮培養基（使它們具有條件培養基）來培養。您不需要每次都離心細胞并重新傳代。當在我們的實驗室中培養時，到第2天，細胞通?？梢詳U增到具有更多培養基的更大的燒瓶中。當細胞密度達到8×10?⁵個活細胞/ ml時需要進行傳代。不允許細胞密度超過1×10（6）活細胞/ ml。）

二．?細胞處理：

1）?凍存細胞的復蘇：：

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養基的培養瓶（或皿）中37℃培養過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

2）?細胞換液:?通常情況下可以通過向正在生長的細胞中添加完全培養基來維持細胞的生長，每7天可以將細胞離心并重懸于新配的培養基中，來完成細胞的全換液。

3）?細胞傳代：傳代時控制細胞密度在2-4?×10⁵cell / mL，并在細胞生長至8-10?×10⁵cell / mL時進行傳代。

3）?細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。????

1，細胞凍存時，取上清，可使用血球計數板計數。

??????2，4min?，1000rpm?離心去掉上清。加1ml血清重懸細胞，根據細胞數量加入凍存液，輕輕混勻，DMSO終濃度為5%，細胞密度2x10⁶/支，每支凍存管凍存1ml細胞懸液，注意凍存管做好標識。

注意事項：

1.?所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2.?建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉化成氣相可能導致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產生飛揚的碎屑造成人員傷害。

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