產(chǎn)品說(shuō)明
過(guò)氧化物酶?(酶分類號(hào)?1.11.1.x)催化如下氧化還原反應(yīng)：
????ROOR?+?電子供體(2?e-)?+?2H+?→?ROH?+?ROH
許多過(guò)氧化物酶的最佳底物為過(guò)氧化氫(H2O2)，而其他的則是機(jī)體內(nèi)的過(guò)氧化物，如脂類過(guò)氧化物。?在細(xì)胞中，過(guò)氧化物酶能破壞有氧呼吸過(guò)程中形成的副產(chǎn)物毒性羥基。它作為一大族酶存在于動(dòng)物、植物、真菌、細(xì)菌中。簡(jiǎn)單、直接、自動(dòng)化的過(guò)氧化物酶測(cè)試方法受到了廣泛的應(yīng)用。本公司的過(guò)氧化物酶測(cè)試方法是利用過(guò)氧化氫與電子供體反應(yīng)形成粉紅色產(chǎn)物，其吸光強(qiáng)度(570nm)或熒光強(qiáng)度?(lexc?=?530nm,?lem?=?590nm)可直接用于測(cè)定酶活性。?
產(chǎn)品特點(diǎn)
用10?mL樣本，檢測(cè)范圍：吸光法4?-?1000?U/L，熒光法0.8?-?25?U/L。
試劑盒組成(96孔板供100份測(cè)試)
緩沖液?(pH?7.0)：?20?mL | 顯色劑：????60?mL |
穩(wěn)定H2O2：?100?mL?3%??????????????????????? | 終止試劑：12?mL |
校準(zhǔn)液：5?mL?(相當(dāng)于1000?U/L) |
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儲(chǔ)藏條件：室溫運(yùn)輸，緩沖液和顯色劑在-20°C下保存，其余試劑在4°C下保存，保質(zhì)期3個(gè)月。
預(yù)防措施：本產(chǎn)品僅供研究用。使用過(guò)程中應(yīng)嚴(yán)格遵循實(shí)驗(yàn)安全措施。
樣品制備：樣品可以照方法[1-3]制備。為確保反應(yīng)處于檢測(cè)范圍內(nèi)，宜將樣品稀釋多次后測(cè)試。
試劑制備：測(cè)試前將所有試劑放置至室溫。將緩沖液中3%的H2O2稀釋至?0.6%?并在一小時(shí)之內(nèi)使用。
總則：該項(xiàng)測(cè)試基于反應(yīng)動(dòng)力學(xué),?建議用多通道加樣器添加工作試劑和終止試劑。
96孔板比色法測(cè)試步驟?
1.?取透明平底的96孔板，分別將200mL水和200mL校準(zhǔn)液放入兩孔中。
????再分別取10mL水(空白對(duì)照)和10mL樣品放入不同兩孔。另外，每個(gè)檢測(cè)孔按95?mL緩沖液、0.5?mL顯色劑、0.5?mL新稀釋的0.6%?H2O2混合制備工作試劑。在每個(gè)孔板中分別加入90mL工作試劑，輕敲孔板使其混合。?室溫下培養(yǎng)10分鐘。
2.?在空白對(duì)照和樣品孔板中分別加入100?mL終止試劑。輕敲孔板使其混合并讀取OD570nm值。
注：若樣本的OD值高于校準(zhǔn)液OD值，需稀釋樣本并重復(fù)檢測(cè)，結(jié)果需乘稀釋系數(shù)。過(guò)氧化物酶活性計(jì)算如下：
單位定義：在測(cè)試條件下，一單位的酶每分鐘可以催化1?mmole過(guò)氧化氫的降解反應(yīng)。
96孔板熒光法測(cè)試步驟
?利用黑色平底板進(jìn)行測(cè)試。若需要，可將過(guò)氧化物酶標(biāo)準(zhǔn)品(未提供)一同對(duì)比測(cè)試。
1.取10mL水和10mL樣品放置于兩孔，每個(gè)檢測(cè)孔按95?mL?緩沖液、0.5?mL顯色劑、0.5?mL?新稀釋的0.6%?H2O2?混合制備工作試劑。在每個(gè)孔板中分別加入90?mL工作試劑，輕敲孔板使其混合。室溫下培養(yǎng)10分鐘。
2.?在空白對(duì)照和樣品孔板中分別加入100?mL終止試劑。輕敲孔板使其混合并讀取在590nm處的熒光值(lexc=?530nm)。
384孔板熒光法測(cè)試步驟
用5?mL?水、5?mL樣品、?35?mL?工作試劑(由38?mL?緩沖液,?0.2?mL?顯色劑,?0.2?mL?0.6%?H2O2?配制)、40?mL終止試劑，按照上述方法進(jìn)行測(cè)試。
實(shí)驗(yàn)必需品(未提供)
比色法測(cè)試：吸液用儀器、離心管、透明平底96孔板、384孔板；熒光法測(cè)試：黑色平底96孔板、384孔板及相應(yīng)吸光率閱讀儀。?
