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siRNA合成/慢病毒包裝/腺病毒包裝

siRNA合成

siRNA合成是機(jī)體或細(xì)胞實(shí)現(xiàn)基因沉默最為簡(jiǎn)捷的方法，成本低、轉(zhuǎn)染效率高，是RNAi臨床治療的最佳手段，在藥物開發(fā)方面具有不可替代的優(yōu)勢(shì)。 通用生物可為客戶提供普通的化學(xué)合成siRNA，同時(shí)可根據(jù)客戶需求，提供多種修飾的siRNA。

慢病毒包裝

慢病毒Lentivirus是逆轉(zhuǎn)錄病毒的一種，具有逆轉(zhuǎn)錄病毒的基本結(jié)構(gòu)和特性；能整合入宿主細(xì)胞因組，長(zhǎng)期表達(dá)，可用于轉(zhuǎn)基因動(dòng)物制備；但也有不同于逆轉(zhuǎn)錄病毒的組分和特性；比逆轉(zhuǎn)錄病毒具有更高的滴度，不僅可以感染分裂細(xì)胞，更重要的是還能感染非分裂的細(xì)胞。

利用Lentivirus構(gòu)建的shRNA表達(dá)載體，與化學(xué)合成的siRNA和基于瞬時(shí)表達(dá)載體構(gòu)建的shRNA相比，一方面可以替代后者，另一方面，Lentivirus-shRNA載體經(jīng)包裝系統(tǒng)包裝后，可用于感染依靠傳統(tǒng)轉(zhuǎn)染試劑難于轉(zhuǎn)染的細(xì)胞（如原代細(xì)胞、懸浮細(xì)胞等），并且在感染后可以整合到受感細(xì)胞的基因組，進(jìn)行長(zhǎng)時(shí)間的穩(wěn)定表達(dá)，是制備穩(wěn)定表達(dá)shRNA細(xì)胞株和進(jìn)行體內(nèi)實(shí)驗(yàn)(in vivo)的最有效手段。
目前我們能夠?yàn)榭蛻籼峁妮d體構(gòu)建到慢病毒包裝純化和檢測(cè)的一站式服務(wù)； 同時(shí)公司還在高效慢病毒生產(chǎn)技術(shù)的基礎(chǔ)上建立并完善了慢病毒載體制備轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。

慢病毒載體構(gòu)建包裝流程

1. 根據(jù)目的基因相關(guān)信息（序列，基因序列號(hào)等），構(gòu)建含有外源基因或序列的重組載體；
2. 對(duì)于測(cè)序正確的重組質(zhì)粒，提取和純化高質(zhì)量（不含內(nèi)毒素）的重組質(zhì)粒；
3. 使用高效重組載體和慢病毒包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T?細(xì)胞，進(jìn)行病毒包裝并收集上清液；
4. 通過(guò)超濾和超速離心濃縮和純化病毒；
5. 用病毒液感染293T細(xì)胞，測(cè)定病毒滴度；

用高質(zhì)量的病毒液感染靶細(xì)胞，通過(guò)定量PCR或者Westenblot檢測(cè)目的基因表達(dá)，也可以進(jìn)一步進(jìn)行穩(wěn)定細(xì)胞株的篩選用于長(zhǎng)期的功能學(xué)研究。

RNAi與慢病毒載體技術(shù)服務(wù)

近年來(lái)的研究表明，將與mRNA對(duì)應(yīng)的正義RNA和反義RNA組成的雙鏈RNA(dsRNA)導(dǎo)入細(xì)胞，可以使mRNA發(fā)生特異性的降解，導(dǎo)致其相應(yīng)的基因沉默。這種轉(zhuǎn)錄后基因沉默機(jī)制(PTGS)被稱為RNA干擾（RNAi）。通過(guò)構(gòu)建RNAi表達(dá)載體制備shRNA(發(fā)卡結(jié)構(gòu)小干擾RNA)，已成為進(jìn)行RNA干擾實(shí)驗(yàn)的常用手段之一。?而目前為了感染原代細(xì)胞和難感染的細(xì)胞系或者在動(dòng)物水平進(jìn)行RNAi，研究科學(xué)家更多的選擇了慢病毒載體。在RNAi研究中，為了感染原代細(xì)胞和難感染的細(xì)胞系，科學(xué)家開始借助于病毒載體實(shí)現(xiàn)RNAi；由于慢病毒可以同時(shí)感染分裂和非分裂細(xì)胞、整合性以及免疫原性低等優(yōu)點(diǎn)，目前在RNAi的研究中，基于慢病毒構(gòu)建的shRNA被最廣泛的使用。? ??

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腺病毒包裝

腺病毒(adenovirus)是一種沒(méi)有包膜的直徑為70～90 nm的顆粒，由252個(gè)殼粒呈廿面體排列構(gòu)成。每個(gè)殼粒的直徑為7～9 nm。衣殼里是線狀雙鏈DNA分子，約含35 000 bp，兩端各有長(zhǎng)約100 bp的反向重復(fù)序列。由于每條DNA鏈的5，端同相對(duì)分子質(zhì)量為55X103Da的蛋白質(zhì)分子共價(jià)結(jié)合，可以出現(xiàn)雙鏈DNA的環(huán)狀結(jié)構(gòu)。人體腺病毒已知有33種，分別命名為adl～ad33，研究得最詳細(xì)是ad2。腺病毒基因組轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生mRNA，已知的轉(zhuǎn)錄單位至少有5個(gè)：正Ⅰ區(qū)位于病毒基因組左側(cè)，可再分成正ⅠA和正ⅠB，與細(xì)胞轉(zhuǎn)化有關(guān)；正Ⅱ區(qū)編碼DNA結(jié)合蛋白，參與病毒的復(fù)制；正Ⅲ區(qū)編碼出現(xiàn)在宿主細(xì)胞表面的一種糖蛋白；正Ⅳ區(qū)位于ad2基因組右端，受正Ⅱ區(qū)編碼的DNA結(jié)合蛋白質(zhì)調(diào)控；第5個(gè)轉(zhuǎn)錄單位在病毒感染中期合成ad2蛋白質(zhì)Ⅳ。?
腺病毒特性：
威斯騰生物腺病毒表達(dá)系統(tǒng)是以Ad5血清型E1/E3缺陷型腺病毒DNA為骨架，在克隆、包裝、擴(kuò)增等各部分條件做了改進(jìn)和優(yōu)化，達(dá)到了克隆陽(yáng)性率更高、質(zhì)量更可靠、包裝穩(wěn)定、出毒迅速、滴度高等效果。在此基礎(chǔ)上，提供各種帶有不同報(bào)告基因、不同標(biāo)簽的重組腺病毒載體服務(wù)。同時(shí)我們還可以根據(jù)客戶需要完成各種較高難度的載體構(gòu)建，如雙基因載體構(gòu)建，具有細(xì)胞毒性作用基因的腺病毒載體構(gòu)建等。所得到的毒液可以用于信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、基因轉(zhuǎn)位、Co-IP、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)、干細(xì)胞研究等科研實(shí)驗(yàn)。
我們的服務(wù)：
（1）表達(dá)目的基因的重組腺病毒載體構(gòu)建服務(wù)（最大插入片段5kb）
（2）超大量及超高滴度的重組腺病毒擴(kuò)增和純化服務(wù)
（3）重組腺病毒載體的鑒定
（4）shRNA基因沉默效應(yīng)驗(yàn)證
（5）表達(dá)shRNA的重組腺病毒載體的構(gòu)建服務(wù)
（6）構(gòu)建各種帶不同標(biāo)簽和不同報(bào)告基因的腺病毒載體
（7）可調(diào)控表達(dá)的重組腺病毒載體
（8）目的基因的克隆，或者定購(gòu)
（9）質(zhì)量控制
服務(wù)承諾：
（1）我們承諾從得到cDNA到完成純化的服務(wù)時(shí)間將在70個(gè)工作日內(nèi)完成
（2）我們承諾所提供的病毒毒液的滴度在1011PFU/ml以上（純化后），總量不少于1012 PFU/ml
（3）?所提供的毒液量：2～3ml
（4）?可以包裝任何有細(xì)胞毒性作用的基因；保證100%的包裝成功率