如何進行組蛋白泛素化樣本前處理?-蛋白相關服務 -技術服務-生物在線

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北京百泰派克生物科技有限公司
如何進行組蛋白泛素化樣本前處理?

如何進行組蛋白泛素化樣本前處理?

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產品名稱: 如何進行組蛋白泛素化樣本前處理?

英文名稱: How to Prepare Samples for Histone Ubiquitination Analysis?

產品編號: histone-ubiquitination-analysis-zh13

產品價格: 詢價

產品產地: 中國北京

品牌商標: 百泰派克生物科技

更新時間: 2026-06-24T11:33:36

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北京百泰派克生物科技有限公司
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組蛋白泛素化作為關鍵的翻譯后修飾,在基因表達調控、DNA修復、細胞周期調控及癌癥發展中發揮重要作用。高質量的樣本前處理是獲得可靠實驗數據的前提,能有效保護低豐度泛素化信號,并提高質譜或免疫學分析的準確性和重復性。

 

一、樣本選擇與處理原則

組蛋白泛素化研究可涉及多種生物樣本,包括細胞、組織及血液或外泌體等特殊樣本。

1、細胞樣本

常用哺乳動物細胞如HEK293、Hela或干細胞,其核酸含量高,便于染色質提取。細胞收獲后應快速低溫操作,并加入蛋白酶抑制劑和去泛素化酶抑制劑(如NEM),保護組蛋白及其泛素化狀態。

 

2、組織樣本

新鮮或冷凍組織需快速液氮研磨,以防止泛素化修飾降解。對于低起始量樣本,可優化裂解緩沖液和處理策略,保證泛素化信號的完整性。

 

3、處理原則

  • 全程低溫操作(4℃或液氮冷凍)。
  • 添加蛋白酶及去泛素化酶抑制劑。
  • 選擇合適的裂解緩沖液,兼顧細胞裂解效率和蛋白穩定性。

二、組蛋白提取方法

組蛋白提取是前處理核心環節。常用方法包括酸性提取、核提取-鹽梯度法和商業化試劑盒。

1、酸性提取法

利用組蛋白在強酸條件下可溶解的特性,將組蛋白從核沉淀中釋放出來,操作簡單、回收率高。但需注意酸性條件可能對某些泛素化修飾造成影響。

 

2、核提取-鹽梯度法

通過高鹽提取核蛋白,可保留染色質結構和泛素化位點的天然狀態,適合下游免疫富集和質譜分析。

 

3、 商業化試劑盒

提供標準化操作流程,減少實驗差異。百泰派克生物科技還可提供優化使用指導和定制化樣本處理方案。

 

三、組蛋白泛素化肽段富集策略

泛素化修飾豐度低,富集步驟對于后續分析至關重要。

1、抗體免疫沉淀

使用H2AK119Ub或H2BK120Ub抗體捕獲特定修飾的組蛋白或肽段,可與質譜結合,實現高靈敏檢測。

 

2、泛素殘基標記法(diGly富集)

泛素連接賴氨酸殘基后,酶解保留diGly殘基,通過抗diGly抗體富集,可顯著提高低豐度泛素化肽段的檢測率,是現代組蛋白泛素化質譜研究主流方法。

 

四、組蛋白泛素化樣本前處理的質量控制

  • 高質量的前處理還需嚴格的質量控制。
  • 蛋白濃度測定:通過BCA或Bradford方法保證輸入量適合富集與質譜分析。
  • SDS-PAGE分析:檢查組蛋白提取完整性及是否降解,可結合泛素化抗體評估修飾保留情況。
  • 小規模質譜預檢測:確認泛素化肽段可檢測,為大規模分析提供參考。

組蛋白泛素化樣本前處理是解析這一關鍵翻譯后修飾的基礎環節。通過科學選擇樣本類型、提取方法和富集策略,并結合嚴格質量控制,可以最大限度保留泛素化信號,保證后續分析準確性。借助百泰派克生物科技的高分辨質譜平臺與定制化組蛋白組學服務,研究者能夠高效、可靠地獲得泛素化數據,從而深入揭示其在基因調控、DNA修復及疾病機制中的作用,為生命科學研究和表觀遺傳藥物開發提供堅實支撐。

 

百泰派克生物科技特色項目

 

一、蛋白測序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統對蛋白質序列進行分析,提供基于質譜的蛋白測序分析服務,包括對蛋白質的氨基酸組成分析,N端測序,C端測序和全序列分析,以及基于埃德曼降解的蛋白質N端序列分析服務。對于未知理論序列的蛋白質,提供基于從頭測序法的蛋白質從頭測序服務,對蛋白序列進行分析。

 

※服務優勢:

1.采用目前世界上先進的質譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實現對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;

4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug,即可完成檢測;

6.測序不受N端封閉,PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

 

 

二、蛋白質組學

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質譜平臺結合Nano-LC,提供定量蛋白質組學、靶向蛋白質組學、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種蛋白質組學分析服務。此外,百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白質組學服務,助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫學及高通量修飾組學等研究工作。

 

※服務優勢:

1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規模實驗分析,發現新的生物標記物;

2.體內體外多種蛋白質標記方法,適用于分析組織、細胞、血液等多種樣品;

3.質譜分析靈敏度高,實驗結果重復度高;

4.可檢測較低豐度蛋白,線性范圍廣;

5.專業生物信息學分析,分析更系統準確。

 

 

三、單細胞質譜流式技術分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質譜流式系統進行單細胞質譜流式技術分析,采用金屬元素標記物(通常是金屬元素標記的特異抗體)標記細胞表面和內部的分子,然后用流式細胞原理分離單個細胞,再用電感耦合等離子體質譜(ICP-MS)分析單個細胞的原子質量譜,最后將原子質量譜數據轉換為細胞表面和內部的信號分子表達量。

 

※服務優勢:

1.技術先進,填補技術空白

采用金屬標記抗體技術,避免了傳統流式熒光通道少且易相互影響的問題。可在單細胞層面上對多種指標同時進行表征,百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。

2.分析數量大,成本較低

單細胞RNAseq受成本等因素限制,所有樣本細胞匯總的分析數目一般在2x10^4個左右,而流式質譜技術一次(單樣本)就可分析至少10^5的細胞,實現了數量級的提高,且成本不高于單細胞RNAseq。

3.應用前景大

①流式質譜結果可以給出細胞亞群的變化,在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景;

②將金屬標簽技術與其他技術結合會有新應用方向。除常規蛋白外,質譜流式細胞技術還可用于蛋白翻譯后修飾;

③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

 

 

四、基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現

百泰派克生物科技的基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析,可從最小的樣品材料中進行可重復的識別和定量。該服務可以應用于大規模的研究,旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案,深入挖掘未知的靶標。

 

 

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質譜技術,MALDI TOF,高效色譜分離技術,提供一系列完善的生物藥物分析方案,從蛋白質、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結構分析,到產品變異性和純度分析。旨在提供優質生物藥物分析服務,幫助生物醫藥生產商提高生物藥物品質。

 

 

百泰派克生物科技七大檢測平臺

 

 

 

百泰派克生物科技-生物制品表征,生物質譜多組學優質服務商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫療器械行業提供質量控制檢測和項目驗證等專業服務。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規和指導原則,通過CNAS/ISO9001雙重質量體系認證,建立了完備的質量體系,數據冷熱/異地備份,設備定期計量/期間核查,軟件審計追蹤,為客戶提供一體化解決方案和技術服務,支持新藥研發、藥物申報注冊和生產放行。

1.公司采用ISO9001質量控制體系,專業提供以質譜為基礎的CRO檢測分析服務;

2.獲國家CNAS實驗室認可,為客戶提供符合全球藥政法規的藥物質量研究服務;

3.業務范圍覆蓋蛋白質組學、多肽組學、代謝組學、生物藥物表征、單細胞分析、單細胞質譜流式、生信云分析以及多組學生物質譜整合分析等;

4.七大質量控制檢測平臺,滿足您一站式服務需求;

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6.致力于為您提供優質的生物質譜分析服務!

 

 

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