本品是一款可用于重組酶聚合酶擴增（Recombinase Polymerase Amplification, RPA）的原料，利用重組酶、單鏈DNA結合蛋白和鏈置換DNA聚合酶等開發出的一種適用于RNA核酸檢測的恒溫擴增原料，搭配客戶設計的Nfo探針等，即可通過測流層析試紙條進行檢測結果判讀。

本品是在電泳型RPA原料的基礎上，加入了核酸內切酶Ⅳ（endonuclease Ⅳ，即nfo，Cat#14543ES），客戶只需設計nfo探針和生物素標記的反向引物，擴增過程中當nfo探針與模板鏈互補時，核酸外切酶Ⅳ識別并切割THF殘基位點，獲得既有探針標記物又有引物標記物的擴增子，只需加入對應的標記抗體，即可觀察到試紙條檢測線上的結果條帶。

1、T4 Uvs X、T4 Uvs Y、GP32、Bsu DNA Polymerase、CK等多酶參與；

2、恒溫37-42℃反應10~30 min，即可將少量核酸分子擴增到可檢測水平；

3、檢測靈敏度可達單個拷貝和數十個拷貝或更少的RNA；

4、對儀器依賴程度低，操作簡便、結果判讀簡單；

5、廣泛應用于體外診斷、獸醫、食品安全、生物安全、農業等領域。

1、引物設計

推薦引物設計長度在30-35bp之間，引物設計過程中應當盡量避免形成復雜的二級結構，下游引物5’端需要進行標記（所用的試紙條相匹配，例如生物素、地高辛等），最終擴增產物的長度推薦在100-500bp之間。

2、 分子探針設計

       分子探針長度約46-52個核苷酸，其中5’端距離THF位置約30-35 bp，3’端距離THF位置約15 bp。探針的5’端用一種抗原標記物標記，通常為FAM基團或羧基熒光素；內部含有堿基核苷酸類似物替換核苷酸（例如四氫呋喃殘基THF）； 3’末端有聚合酶延伸阻斷基團（例如C3-spacer，磷酸基或雙脫氧核苷酸）。

注意：THF標記是取代序列中的堿基，并非額外插入THF標記；在開始實驗前檢查探針5’端標記的基團與下游引物5’端標記的基團是否與所用的試紙條相匹配。

-25~-15℃保存，有效期1年；試劑請提前分裝。