<p>&lt;div id="a1" class="tab-pane active"&gt; &lt;div id="d1" class="p2"&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 18px;"&gt;&lt;strong&gt;細胞介紹&lt;/strong&gt;&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 18px;"&gt;加拿大渥太華大學的Mc Burney 等在1982 年從雄性小鼠畸胎瘤中分離得到的 , 是一種能夠在體外培養的多能干細胞, P19 細胞團經RA 誘導可分化成神經元、膠質細胞和纖維母細胞; 而經二甲基亞砜(DM SO ) 誘導則分化成心肌、骨骼肌和平滑肌細胞;在P19細胞向神經元分化的過程中，神經發育相關基因的表達模式基本模擬了正常小鼠神經發育過程, 因此, P19 目前被用作一個研究神經發育的體外模型。&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 18px;"&gt;P19 細胞作為研究神經分化機制的模型, 顯著區別于其他細胞系的四大特點是: &lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 18px;"&gt;①它具有正常小鼠的二倍體核型, 細胞分裂快, 可在體外迅速大量擴增, 多次傳代也不喪失其分化能力。&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 18px;"&gt;②P19 細胞具有多種分化潛力, 不同誘導條件下可定向分化成不同類型的細胞, 種植到孕鼠囊胚中能分化成多種類型細胞。&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 18px;"&gt;③根據P19 細胞誘導分化分階段進行的特點, 能將神經分化的早期機制與參與突起延伸的機制分開研究。&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 18px;"&gt;④該細胞易于轉染, 且轉染后仍能正常分化, 適于進行細胞基因研究。通過轉染正常或突變的目的基因, 增強或抑制它們的表達水平可用于研究這些基因在神經分化中的作用。另外, 利用反義RNA 阻斷內源蛋白的表達, 可用來觀察這些蛋白在神經分化中的作用。&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 18px;"&gt;&lt;strong&gt;細胞特性&lt;/strong&gt;&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 18px;"&gt;1）&amp;nbsp;來源：胚胎；畸胎癌&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 18px;"&gt;2）&amp;nbsp;形態：上皮細胞樣&amp;nbsp;貼壁生長&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 18px;"&gt;3）&amp;nbsp;含量：&amp;gt;1x10^6&amp;nbsp;&amp;nbsp;細胞數&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 18px;"&gt;4）&amp;nbsp;規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 18px;"&gt;5)&amp;nbsp;&amp;nbsp;用途：僅供科研使用。&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 18px;"&gt;&lt;strong&gt;運輸和保存&lt;/strong&gt;&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 18px;"&gt;&lt;strong&gt;干冰運輸及復蘇好存活細胞&lt;/strong&gt;&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 18px;"&gt;（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇，若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯系。&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 18px;"&gt;（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 18px;"&gt;&lt;strong&gt;細胞接收后的處理&lt;/strong&gt;&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 18px;"&gt;1）收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯系我們。&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 18px;"&gt;2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態，同時給剛收到的細胞拍照（10&amp;times;，20&amp;times;）各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態的依據。&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 18px;"&gt;3）貼壁細胞：細胞在37℃培養箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養瓶中灌液培養基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養瓶中）,加入新配制的完全培養基6-8mL，放到細胞培養箱中繼續培養。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 18px;"&gt;4）&lt;strong&gt;備注：運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的完全培養基來培養細胞。&amp;nbsp;&amp;nbsp;收到細胞后第一次傳代建議T25培養瓶1：2傳代 。&lt;/strong&gt;&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 18px;"&gt;&lt;strong&gt;一．培養基及培養凍存條件準備：&lt;/strong&gt;&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="color: #c00000; font-size: 18px;"&gt;&lt;strong&gt;1）準備MEM&amp;alpha;基礎培養基 (推薦：iCell-0003)，小牛血清 7.5 %&amp;nbsp;，優質胎牛血清2.5 %，P/S&amp;nbsp;1 %&lt;/strong&gt;&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="color: #c00000; font-size: 18px;"&gt;&lt;strong&gt;2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。&lt;/strong&gt;&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 18px;"&gt;3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 18px;"&gt;&lt;strong&gt;二．細胞處理：&lt;/strong&gt;&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 18px;"&gt;&lt;strong&gt;1）&amp;nbsp;凍存細胞的復蘇：&lt;/strong&gt;&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 18px;"&gt;將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養基的培養瓶（或皿）中37℃培養過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 18px;"&gt;2）&amp;nbsp;細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 18px;"&gt;&lt;strong&gt;對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法：&lt;/strong&gt;&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 18px;"&gt;1.&amp;nbsp;棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 18px;"&gt;2.&amp;nbsp;加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養基來終止消化。&amp;nbsp;&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 18px;"&gt;3.輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長活力，后續傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 18px;"&gt;3）細胞凍存: 收到細胞后建議在培養前3代時凍存一批細胞種子以備后續實驗使用。&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 18px;"&gt;&lt;strong&gt;下面T25瓶為例；&lt;/strong&gt;&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 18px;"&gt;1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數板計數，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1&amp;times;10^6~1&amp;times;10^7個活細胞/ml.&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 18px;"&gt;2. 1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1ml凍存液含1&amp;times;10^6~1&amp;times;10^7個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數、日期等信息。&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 18px;"&gt;3. 將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續查閱和使用。&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="color: #c00000; font-size: 18px;"&gt;&lt;strong&gt;References:&lt;/strong&gt;&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 18px;"&gt;&lt;strong&gt;&lt;span style="color: #c00000;"&gt;【1】.張金平等.&amp;nbsp;全反式維甲酸體外誘導P19細胞向心肌方向分化.[J]中國組織化學與細胞化學雜志.2012.1，&lt;/span&gt;&lt;/strong&gt;&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 18px;"&gt;&lt;strong&gt;&lt;span style="color: #c00000;"&gt;【2】.梅宇欽等. 建立經優化的促P19鼠胚胎癌細胞神經分化模型.浙江大學學報（醫學版）2012.04)&lt;/span&gt;&lt;/strong&gt;&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;/div&gt; &lt;/div&gt;</p>