【評價原理】

臨床上顯示常見的青光眼視神經病變、糖尿病性視網膜病變以及視網膜中央動靜脈阻塞等疾病的發生都與缺氧有關系。組織的缺氧被視為視網膜血管疾病的重要原因，而與血管相關的視網膜疾病恰恰是臨床上導致視力喪失的最主要原因。斑馬魚視網膜結構與人類高度相似，這使得斑馬魚胚胎能夠模擬視網膜新生血管，為在短時間內快速評估功效提供了模型。

氯化鈷是廣泛使用的化學缺氧模擬劑，其鈷可以取代特定前體羥化酶中的鐵離子，使羥化活性失活。缺氧條件下，能夠誘導轉錄因子（hif）和血管內皮生長因子（vegf）的表達，誘發新生血管形成。

改善濕性黃斑變性有3個指標：（1）采用轉基因血管內皮細胞綠色熒光斑馬魚，可在熒光顯微鏡在觀察到缺氧的斑馬魚視網膜血管明顯增多增粗；（2）同時制作病理切片，進行蘇木素-伊紅染色，觀察視網膜結構變化；（3）檢測hif、vegf基因相對表達量。

【實驗方案】

我們將受測試斑馬魚分成三組，分別是正常對照組、模型對照組和黃斑變性藥物組。其中正常對照組未攝入氯化鈷，模型對照組與黃斑變性藥物組都攝入了等量的氯化鈷（氯化鈷通過溶于魚水的方式攝入到斑馬魚體內）。黃斑變性藥物組在攝入氯化鈷的同時給予施圖倫滴眼液、貝伐單抗之類的黃斑變性藥物。

服用/注射一段時間黃斑變性藥物后，我們在熒光顯微鏡下觀察斑馬魚視網膜血管的變化，制作成病理切片觀察視網膜的病理結構變化，檢測hif、vegf基因相對表達量。

【結果展示】

圖1. 斑馬魚視網膜血管表型圖

可以看到，服用/注射黃斑變性藥物組的視網膜血管面積與正常對照組比較相似，沒有明顯的血管增多增粗。

圖2. 視網膜結構表型圖

從病理切片中也能看出來，模型斑馬魚眼睛病理切片的色素上皮層和外核層結構紊亂、變薄，而服用/注射黃斑變性藥物組的色素上皮層和外核層結構均有所恢復。

圖3. hif-1α基因相對表達量

可以看到，模型斑馬魚hif-1α基因表達顯著升高，服用/注射黃斑變性藥物組該基因明顯下降。

【評價結論】

1.經過每組30尾斑馬魚的對比實驗，服用/注射黃斑變性藥物組與模型對照組比較，視網膜血管明顯變細、視網膜結構較正常、hif-1α基因表達下調。

2.本實驗證實了施圖倫滴眼液、貝伐單抗具有明顯的濕性黃斑變性防治作用。

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