EGY48酵母感受態細胞

保存條件：-80℃。

1.產品簡介：

EGY48菌株是LexA系統酵母雙雜實驗用菌株，MATα型，可直接轉化質粒驗證蛋白互作或篩庫；Transformation marker為： his3，trp1,ura3，報告基因為：LEU2；報告基因UAS (上游激 活序列)來源于LexA op(x6)，只有當Bait和Prey互作時才能啟動LEU2表達。EGY48-LexA系統有三種配套質粒：pLexA、pB42AD、 p8op-LacZ。質粒pLexA篩選標志為HIS3，用于表達DNA-BD與目 標蛋白(Bait)的融合蛋白；質粒pB42AD篩選標志為TRP1，用于表達AD與目標蛋白(Prey)的融合蛋白；報告質粒p8op-LacZ篩選 標志為URA3，報告基因為LacZ，報告基因UAS來源于LexA op(x6)，只有當Bait和Prey互作時才能啟動LacZ表達。EGY48感受態細胞經特殊工藝制作，pGBKT7質粒檢測轉化效率 >10⁴ cfu/μg DNA

基因型：MATα, ura3, his3, trp1, LexAop (x6)-L

2.使用說明：

1).取一支無菌的1.5ml EP管，依次加入預冷的目的質粒1-3μg, .Carrier DNA 10μl(95-100℃ 5min快速冰浴，重復一次)，100μl冰.上融化的EGY48感受態細胞，PEG/LiAc 500ul， 輕輕翻轉混勻6-8次;

2).30℃ 水浴30min，每10min輕輕翻轉混勻6-8次;

3).每支加入20ul的二甲基亞砜; (用于提高轉化效率，可不做)

4).42℃水浴15min，每5min輕輕翻轉混勻6- 8次;

5).12000rpm瞬時離心棄上清,每支加入1m1的YPD Plus于30℃復蘇1h; (用于提高轉化效率， 可不做)

6).12000rpm瞬時離心棄上清，用100ul 0.9% NaCl 重懸，涂板,30℃培養48 - 96h。

3.注意事項：

1).感受態細胞最好在冰上融化.

2).PEG溶液在低溫環境下會析出，請于常溫下完全溶解后使用。

*本試劑僅供實驗室研究使用