mRNA Cap 2′-O-Methyltransferase
產品名稱： mRNA Cap 2′-O-Methyltransferase
英文名稱： mRNA Cap 2′-O-Methyltransferase
產品編號： Frd00027
產品價格： 20ul/500
產品產地： null
品牌商標： Frdbio
更新時間： 2023-12-26T14:22:45
使用范圍： null
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mRNA Cap 2´-O-Methyltransferase (50 U/μL) 產品說明書
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產品名稱 |
產品貨號 |
規格 |
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mRNA Cap 2'-O-Methyltransferase (50 U/μL) |
Frd00027 |
20ul/100 μL |
產品概述
mRNA Cap 2'-O-Methyltransferase即2'氧甲基轉移酶，來源于攜帶有牛痘病毒mRNA Cap 2´-O-Methyltransferase基因的重組大腸桿菌菌株。該酶可利用S-腺苷甲硫氨酸（SAM）作為甲基供體，對RNA的5´末端緊挨帽結構(Cap0)的第一個核苷酸的2´-O位點進行甲基化，形成帶有Cap1結構的mRNA。Cap1結構能夠增強mRNA的翻譯效率，因此有助于改善mRNA轉染后編碼蛋白的表達水平。該酶能特異性識別7-甲基鳥苷帽結構(m7Gppp，Cap0)，只能作用于帶有m7GpppN的RNA，不可以5´末端為pN、ppN、pppN或GpppN的RNA作為底物。
保存及運輸條件
-30~-15℃保存，干冰運輸。
產品基本信息
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產品名稱 |
mRNA Cap 2'-O-Methyltransferase |
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來源 |
E.coli |
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酶活定義 |
37℃，pH 8.0條件下，1小時內使10 pmol 80 nt帶有m7Gppp帽結構的寡核苷酸轉錄產物甲基化所需要的酶量定義為1個活性單位 |
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儲存緩沖液 |
20 mM Tris-HCl (pH 8.0); 100 mM NaCl; 1 mM DTT; 0.1 mM EDTA; 0.1% TritonX-100; 50% (v/v) Glycerol |
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反應緩沖液（1×） |
50 mM Tris-HCl, pH 8.0; 5 mM KCl; 1 mM MgCl2; 1 mM DTT |
使用方法
1、取10 μg Capped RNA于1.5 mL離心管中，用RNase Free Water稀釋至所需體積。
2、將稀釋的RNA于65℃加熱5 min使RNA變性。
3、冰上放置5 min。
4、按順序加入以下各組分
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組分 |
用量 |
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Denatured Capped RNA |
10 μg |
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10 × Capping Buffer |
2 μL |
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SAM (4 mM) |
1 μL |
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mRNA Cap 2'-O-Methyltransferase (50 U/μl) |
1 μL |
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RNase Free Water |
Up to 20 μL |
5、37℃反應1 h（對于長度小于200 nt的RNA，將反應時間延長至2小時）。
注意事項
1、用于本實驗的RNA必須經過純化并溶解于RNase Free Water。
2、反應前熱處理RNA是為了打開5'末端的高級結構，熱處理時間可根據高級結構的復雜程度調整。
3、SAM室溫下不穩定，降解會導致加帽效率變低，因此，建議將SAM放在冰上。
4、建議在反應體系中加入1-2 μL的RNA酶抑制劑（貨號：SCB0B006），以提高反應過程中RNA的穩定性。
5、加帽反應效率與RNA 5'端結構和RNA長度有關，如果加帽效率低、RNA 5'端結構復雜或RNA長度較短（≤ 200 nt)，建議延長反應時間至2 h。
僅供科研實驗使用