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產(chǎn)品名稱：結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂（VRBA）
產(chǎn)品應(yīng)用：用于大腸菌群的固體平板檢測(cè)(GB、SN標(biāo)準(zhǔn))
? 培養(yǎng)基的保質(zhì)期各不相同。不同的標(biāo)準(zhǔn)中均有明確規(guī)定了保存的條件和保質(zhì)期。培養(yǎng)基應(yīng)保存在防止其成分發(fā)生變化的環(huán)境下，即應(yīng)避光、干燥保存；如有必要，用保存于2℃～8℃冰箱中，或依據(jù)培養(yǎng)基要求的儲(chǔ)存條件進(jìn)行保存。除標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定或保質(zhì)期驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)的結(jié)果表明有較長(zhǎng)的保質(zhì)期外，通常平板保存不超過(guò)2周～4周，三角瓶和試管的保存不超過(guò)3個(gè)月～6個(gè)月。除標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定或保質(zhì)期驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)的結(jié)果表明有較長(zhǎng)的保質(zhì)期外，含有不穩(wěn)定添加成分的培養(yǎng)基應(yīng)即配即用。對(duì)發(fā)生化學(xué)反應(yīng)或含有不穩(wěn)定物質(zhì)的固體培養(yǎng)基也應(yīng)即配即用，不可二次融化。
結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂（VRBA），實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)貯存培養(yǎng)基的有效期進(jìn)行規(guī)定。觀察培養(yǎng)基顏色變化，是否有蒸發(fā)/脫水情況，是否有微生物生長(zhǎng)。當(dāng)培養(yǎng)基發(fā)生這類變化時(shí)，應(yīng)停止使用。在使用和進(jìn)一步加熱前，應(yīng)事先將培養(yǎng)基放置到室溫。
正確制備培養(yǎng)基是微生物檢驗(yàn)的最基礎(chǔ)步驟之一。使用脫水培養(yǎng)基和其他成分，尤其是含有有毒物質(zhì)（如膽鹽或其他選擇劑）的成分時(shí)，應(yīng)遵守良好實(shí)驗(yàn)室規(guī)范和生產(chǎn)廠商提供的使用說(shuō)明。培養(yǎng)基的不正確制備會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)基出現(xiàn)質(zhì)量問(wèn)題。
? 使用商品化脫水合成培養(yǎng)基制備培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)嚴(yán)格按照廠商提供的使用說(shuō)明配置。記錄所有相關(guān)數(shù)據(jù)，如質(zhì)量/體積、pH、制備日期、滅菌條件和制備人員等。
? 使用各別成分制備培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)按照配方準(zhǔn)確配制，記錄所有細(xì)節(jié)信息，如：培養(yǎng)基名稱和類型及試劑級(jí)別、每個(gè)成分物質(zhì)含量、制造商、批號(hào)、pH、培養(yǎng)基體積（分裝體積）、無(wú)菌措施（包括實(shí)施的方式、溫度及時(shí)間）、配置日期、人員等，以便溯源。
結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂（VRBA），將培養(yǎng)基放到沸水浴中或采用其他有相同效果的方法（如高壓鍋中的蒸汽）融化。經(jīng)過(guò)高壓滅菌的培養(yǎng)基盡量減少重新加熱的時(shí)間，避免過(guò)度加熱。培養(yǎng)基融化后立即移開(kāi)，室溫靜置片刻（約2min)，以免玻璃容器發(fā)生破裂。
? 融化后的培養(yǎng)基放人47℃～50℃恒溫水浴鍋中保溫，冷卻到47℃～50℃所需的時(shí)間取決于培養(yǎng)基的類型、體積和在水在鍋里的分裝量。融化后的培養(yǎng)基應(yīng)盡快使用，放置時(shí)間一般不超過(guò)4h。剩余的培養(yǎng)基凝固后不得再次融化使用。特別是靈敏性培養(yǎng)基，應(yīng)根據(jù)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，縮短融化后放置的時(shí)間。
? 將瓊脂培養(yǎng)基倒人類似檢測(cè)培養(yǎng)基使用的獨(dú)立容器中，插入溫度計(jì)，記錄并保存瓊脂的融化、溫度。加入樣品的培養(yǎng)基應(yīng)將溫度調(diào)節(jié)到44℃～47℃，或按照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)調(diào)節(jié)溫度。
對(duì)分離和計(jì)數(shù)培養(yǎng)基而言，至少應(yīng)進(jìn)行半定量測(cè)試。對(duì)于鑒別培養(yǎng)基而言，只需進(jìn)行定性測(cè)試。定量測(cè)試對(duì)培養(yǎng)基的質(zhì)量有更高的保證。
結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂（VRBA），不含指示劑和選擇劑的培養(yǎng)基，只需用陽(yáng)性測(cè)試菌株進(jìn)行檢測(cè)。含有指示劑和選擇劑的培養(yǎng)基，應(yīng)使用能證明其指示和選擇功能的菌株進(jìn)行檢測(cè)。
1.以無(wú)菌操作方式開(kāi)啟凍干菌種管，加入適量培養(yǎng)液（按菌種選擇培養(yǎng)液，如細(xì)菌選擇營(yíng)養(yǎng)肉湯、白色念珠菌選擇沙堡液體培養(yǎng)基、分枝桿菌選擇蘇通綜合液體培養(yǎng)基、黑曲霉菌選擇麥芽浸膏營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基），吹吸數(shù)次，使菌種融化分散。取含5.0 mL～10.0 mL相應(yīng)培養(yǎng)液的試管，滴入少許菌種懸液，在適宜溫度下培養(yǎng)至規(guī)定時(shí)間（一般為36 ℃±1 ℃培養(yǎng)18 h～24 h、黑曲霉菌為30 ℃± 1℃培養(yǎng)42 h～48 h），此為第1代培養(yǎng)物。
? 2.用接種環(huán)取第1代培養(yǎng)物，或從菌種凍存管中取適量菌液/瓷珠，劃線接種于相應(yīng)培養(yǎng)基平板（按菌種選擇培養(yǎng)基，如細(xì)菌選擇營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、白色念珠菌選擇沙堡瓊脂培養(yǎng)基、分枝桿菌選擇改良羅氏培養(yǎng)基或其他商品化分枝桿菌專用復(fù)合瓊脂培養(yǎng)基、黑曲霉菌選擇麥芽浸膏瓊脂培養(yǎng)基），在適宜溫度下培養(yǎng)至規(guī)定時(shí)間（一般為36 ℃±1 ℃培養(yǎng)18 h～24 h、分枝桿菌36 ℃± 1℃培養(yǎng)72 h、黑曲霉菌30 ℃±1 ℃培養(yǎng)42 h～48 h），此為第2代培養(yǎng)物。
? 3.挑取第2代培養(yǎng)物中典型菌落，接種于相應(yīng)培養(yǎng)基斜面或平板（按菌種選擇培養(yǎng)基斜面，如細(xì)菌選擇營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面、白色念珠菌選擇沙堡瓊脂斜面、分枝桿菌選擇改良羅氏培養(yǎng)基或其他商品化分枝桿菌專用復(fù)合瓊脂斜面、黑曲霉菌選擇麥芽浸膏瓊脂培養(yǎng)基平板），在適宜溫度下培養(yǎng)至規(guī)定時(shí)間（一般為36 ℃±1 ℃培養(yǎng)18 h～24 h、分枝桿菌36 ℃±1 ℃培養(yǎng)72 h、黑曲霉菌30 ℃±1 ℃培養(yǎng)42 h～48 h），此為第3代培養(yǎng)物。
? 4.取第3代培養(yǎng)物，接種于相應(yīng)培養(yǎng)基斜面，在適宜溫度下培養(yǎng)至規(guī)定時(shí)間，此為第4代培養(yǎng)物。5.1.5 按上述方法培養(yǎng)至所需代數(shù)，傳代時(shí)在試管上注明菌種名稱、菌種號(hào)、代數(shù)及傳代日期等基本信息。
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