穩轉細胞系構建
定義
穩轉細胞系（穩定表達細胞株）指在細胞中持續穩定表達特定基因或干擾特定基因表達。穩轉細胞株的目的基因質粒DNA整合到細胞染色體上，使細胞長期穩定表達該基因。穩轉細胞株包括多克隆穩轉細胞株和單克隆穩轉細胞株。慢病毒感染目的細胞后，通過抗性基因篩選得到的細胞株是多個細胞克隆的組合。單克隆細胞株是從多克隆細胞中經細胞克隆挑選得到的，由一個細胞擴增得到的細胞株。單克隆細胞株性狀統一，傳代過程中細胞的基因表達保持穩定。
樞密科技慢病毒采用三質粒系統轉染293T細胞包裝慢病毒顆粒，將Gag/Pol和載體分開，并且使用VSV-G的膜蛋白，包裝出來的慢病毒宿主范圍廣，是基因轉導的理想工具。
科研和臨床應用
在基因勸能的研究中，穩定表達細胞株彌補了在一些功自B實驗中瞬時感染（或轉染）由于外源基因表達時間短的缺陷，便于長期觀察基因對于細胞功能的影響以及蛋白質間相互作用。
服務流程
基因/模板DNA合成+載體構建+慢病毒包裝+收獲病毒液+q-PCR檢測病毒滴度測定+慢病毒穩轉細胞株篩選=穩轉細胞株
單克隆細胞系篩選?????
對感染并篩選后的細胞進行稀釋培養，挑取單一細胞生長而成的細胞克隆,再進行擴大培養，以獲得性狀單一，表達穩定的細胞株。
?? 1.將細胞消化后接種于96孔板中，接種的細胞密度為1個孔；
?? 2標記出具有單個細胞的孔，將Puromycin濃度減至維持濃度(篩選濃度的1/2-14)，繼續篩選和擴增；
?? 3.擴增完畢后，收集細胞進行qPCR或Westem Blo鑒定，選擇鑒定結果正常的單克隆細胞凍存保種。
混合克隆細胞系篩選
? 將Puromycin濃度減至維持濃度(篩選濃度的1/2-1/4)，繼續對感染后的細胞進行篩選和擴增，同時收集細胞進行qPCR或Westem Blol鑒定(鑒定目的基因表達水平)，并將鑒定結果正常的細胞凍存保種。
最終交付
慢病毒病毒滴度檢測報告；穩轉細胞株；實驗報告，包括實驗流程、測序結果和峰圖、引物序列、載體圖譜和滴度測定報告和q-PCR穩轉株的檢測等。

穩定細胞系構建