AAV相關病毒包裝服務

腺相關病毒（Adeno-Associated Viral Vector，AAV）屬于微小病毒科( parvovirus)，為無包膜的單鏈線狀 DNA 病毒。AAV 的基因組約 4700bp，包括上下游兩個開放讀碼框架(ORF)，位于分別由 145 個核苷酸組成的 2 個反向末端重復序列(ITR)之間。 由于腺相關病毒具有宿主范圍廣、安全性高、免疫原性低、表達穩定和物理性質穩定等優點，已被廣泛地應用于基礎研究和臨床試驗中，并且腺相關病毒載體已成為世界上最常用的基因治療載體之一。

AAV病毒特點

1.安全性高，目前還沒有發現AAV對人體致??；每10個人中就有8個人在一生中會感染AAV，而rAAV更是去除了96%的AAV基因組，進一步確保了安全性。目前唯一通過歐盟藥監局的基因治療藥物Glybera也是一種rAAV。

2.免疫原性低：當AAV用局部大劑量感染肌肉、腦、眼等組織時，很少有感染上的細胞之后被免疫系統所清除。這種特性對于動物實驗上顯然極有幫助。

3.感染譜廣：幾乎所有處于分裂期和靜止期的細胞都可以使用AAV來感染。

4.表達時間長：rAAV可在宿主細胞中形成附加體（episome）存在于細胞核中，在細胞分裂不旺盛的組織中可持續表達5個月以上。

5.擴散性強：rAAV具有遠高于腺病毒和慢病毒的擴散性，可以穿透血腦屏障，是最理想的神經元和膠質細胞感染工具。

6.高穩定性：rAAV病毒可使用冰袋運輸，并且對氯仿等試劑具有抗性

7.特異性強：rAAV有十數種常用的血清型，不同的血清型對不同的臟器有較高的識別及感染能力。

樞密科技采用2套rAAV制備方法：
1.AAV無輔助病毒系統(AAV Helper-Free System)：
該系統利用已經明確與調節AAV復制和表達的腺病毒基因產物，并且將這些基因產物通過轉染引進宿主細胞。在AAV Helper-Free System中，生產具感染性的AAV病毒顆粒所需的腺病毒基因產物(例如：E2A，E4和VA RNA基因)大部分由與其他質粒共轉染進細胞的pHelper質粒提供，其余的腺病毒基因產物由穩定表達腺病毒E1基因的AAV-293宿主細胞提供。AAV-293細胞是經過改良HEK293腺相關病毒生產能力而衍生出的亞克隆細胞系。由于不再需要活的輔助病毒，AAV Helper-Free System提供一個更安全，更便利的替代逆轉錄病毒和腺病毒的基因傳遞系統。
2.新型桿狀病毒系統制備rAAV的方法：
該系統可通過穿梭載體靈活裝載外源基因的片段，并在細菌內高效重組到桿狀病毒基因組上。再將抽提出的重組桿狀病毒基因組DNA經轉染Sf9昆蟲細胞，產生有感染活性的重組桿狀病毒。然后，利用重組桿狀病毒（BEV）感染懸浮培養的Sf9細胞生產rAAV。新型桿狀病毒系統靈活性高、通用性強、病毒質量高、產量高，適于大規模放大生產，rAAV純化后能夠達到很高的純度，生物安全性高。
AAV載體不同血清型

研究發現 AAV 具有多種血清型，各種不同血清型的 AAV 載體的主要區別是衣殼蛋白不同，因此對不同的組織和細胞的轉染效率存在差異。目前樞密科技提供有12種不同的 AAV 血清型可供客戶選擇，建議客戶針對不同組織器官選擇相應血清型的 AAV 病毒，見下表。

??12種不同血清型AAV對各組織器官細胞的親和性?

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