Colorimetric Glutathione Peroxidase (GSH-PX) assay kit 谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)檢測試劑盒（比色法）
產品名稱： Colorimetric Glutathione Peroxidase (GSH-PX) assay kit 谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)檢測試劑盒（比色法）
英文名稱： Colorimetric Glutathione Peroxidase (GSH-PX) assay kit 谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)檢測試劑盒（比色法）
產品編號： 60746ES
產品價格： null
產品產地： Yeasen
品牌商標： Yeasen
更新時間： 2026-04-02T17:24:05
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谷胱甘肽過氧化物酶（Glutathione peroxidase，GSH-PX）是機體內廣泛存在的一種重要的催化過氧化氫分解的酶。它特異的催化還原型谷胱甘肽（GSH）對過氧化氫的還原反應，可以起到保護細胞膜結構和功能完整的作用。GSH-PX的活性中心是硒半胱氨酸，硒是GSH-PX的必需部分，每克分子酶含4克原子硒。測定GSH-PX的活力可以作為衡量機體硒水平的一項生化指標。
谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）可以促進過氧化氫（H2O2）與還原型谷胱甘肽（GSH）反應生成H2O及氧化型谷胱甘肽（GSSG），谷胱甘肽過氧化物酶的活力可用其酶促反應的速度來表示，測定此酶促反應中還原型谷胱甘肽的消耗，則可求出酶的活力。反應方程式為：
GSH-PX的活力以催化GSH的反應速度來表示，由于這二個底物在沒有酶的條件下，也能進行氧化還原反應（稱非酶促反應），所以最后計算此酶活力時必須扣除非酶促反應所引起的GSH減少的部分。
GSH量的測定：GSH和二硫代二硝基苯甲酸作用生成5-硫代二硝基苯甲酸陰離子呈現較穩定的黃色，在412 nm處測其吸光度即可計算出GSH的量。
產品組分
| 組分編號 | 組分名稱 | 組分規格 | 儲存條件 |
| 60746-A | 試劑一 | 1 mL×1 | 2~8℃，用時按照100倍比例稀釋配成試劑一應用液，現用現配（如取0.1 mL加蒸餾水至10 mL，按需配置即可） |
| 60746-B | 試劑二 | 1 vial | 2~8℃，粉末，每瓶試劑二加蒸餾水85 -88 mL，高溫加熱至完全溶解，然后再與1瓶試劑三混合，配置成試劑二應用液 |
| 60746-C | 試劑三 | 25 mL×1 | 2~8℃ |
| 60746-D | 試劑四 | 1 vial | 2~8℃，每瓶加蒸餾水100 mL溶解；溶解時，可置于37℃環境中加速溶解（如有需要，不是必須） |
| 60746-E | 顯色劑 | 25 mL×1 | 2~8℃，避光 |
| 60746-F | 試劑六 | 1 vial×2 | 2~8℃，避光；試劑六應用液：每瓶加蒸餾水10 mL溶解，溶解后置于2~8℃避光，可保存五天 |
| 60746-G | 試劑七 | 5 mL×1 | 2~8℃，試劑七應用液（標準品溶劑應用液）配制：用時按照試劑七∶蒸餾水=1∶9的比例進行稀釋配置 |
| 60746-H | GSH標準品 | 1 vial×2 | 2~8℃ |
【注】試劑二應用液配置時：試劑二粉末溶解時不要用水浴鍋加熱，不要用隔水加熱的方式（因受熱較慢導致溶解困難），最好用能直接加熱的設備( 如電爐、酒精燈之類的) 加熱，且加熱時不斷攪拌；試劑二應用液配好后為過飽和溶液，室溫靜置冷卻后，如有結晶，則取上清進行實驗即可。
使用說明
一. 血清（血漿）中 GSH-PX 活力的測定
1. 操作方法
- 酶促反應：(試劑一應用液提前5 min在37℃預溫)
表1 加樣方法
| 加樣種類 | 非酶管 | 酶管 |
| 1 mmol/L GSH標準液（mL） | 0.2 | 0.2 |
| 待測血清（血漿）（mL） | / | 0.1 |
| 37℃預溫5分鐘 | ||
| 試劑一應用液（mL） | 0.1 | 0.1 |
| 37℃準確反應5分鐘 | ||
| 試劑二應用液（mL） | 2 | 2 |
| 待測血清（血漿）（mL） | 0.1 | / |
| 混勻，3500-4000 rpm，離心10 min，取上清1 mL作顯色反應 | ||
【注】1 mmol/L GSH標準液配制：測定前取1瓶GSH標準品粉末（60746-H）加到10 mL試劑七應用液（標準品溶劑應用液）中，充分溶解配成1 mmol/L GSH標準液，配好后可置于2~8℃保存1-2周。
- 顯色反應
表2 加樣方法
| 加樣種類 | 空白管 | 標準管 | 非酶管 | 酶管 |
| 標準品溶劑應用液（mL） | 1.0 | / | / | / |
| 20 μmol/L GSH標準液（mL） | / | 1.0 | / | / |
| 上清液（mL） | / | / | 1.0 | 1.0 |
| 試劑四應用液（mL） | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 |
| 顯色劑應用液（mL） | 0.25 | 0.25 | 0.25 | 0.25 |
| 試劑六應用液（mL） | 0.05 | 0.05 | 0.05 | 0.05 |
| 混勻，室溫靜置15 min后，倒入1 cm光徑比色杯中，蒸餾水調零，波長412 nm處，測各管OD值 | ||||
【注】20 μmol/L GSH標準液配制：取1 mmol/L GSH溶液0.2 mL加標準品溶劑應用液定容至10 mL充分混勻配成，現用現配。
【注】正式實驗前，請先進行預實驗，預實驗后再進行批量實驗。
2. 血清中GSH-PX酶活力的計算
a. 定義：每毫升血清在37℃每分鐘，扣除非酶促反應作用，使反應體系中GSH濃度降低1 μmol/L為一個酶活力單位（U）。
b. 計算公式：（液體類的樣本均可按此公式計算）
C標準：顯色反應中的GSH標準液濃度，20 μmol/L；
N：酶促反應體系稀釋倍數，6（2.4 mL/0.4 mL，固定值）；
T：反應時間，5 min；
V樣：樣本取樣量，0.1 mL；
N樣：樣本測試前稀釋倍數。
3. 血清（血漿）的最佳取樣濃度摸索舉例
a. 樣本來源：正常組大鼠眼眶取全血，肝素抗凝取血漿。
b. 樣本前處理：用生理鹽水將血漿按1︰1、1︰4、1︰7、1︰9、1︰14、1︰19稀釋成一系列不同濃度的血漿，分別取不同濃度血漿 0.1 mL 按血清（血漿）的操作表進行檢測。
c. 測定結果：通過公式：
，選取抑制率在45%-55%之間的，作為最佳取樣濃度。
二. 組織、細胞、線粒體中GSH－PX活力的測定
1. 樣本前處理
1）準確稱取待測動物組織的重量，按重量(g)：體積(mL)=1:9 的比例，加入9倍體積的生理鹽水，低溫（0-4℃）條件勻漿，3500 rpm，離心10 min，取上清液待測，制備好的勻漿上清液需要測定其蛋白濃度。
2）線粒體制備及前處理：取10%的組織勻漿5-10 mL，以1000-2000 rpm，離心10 min（普通離心機或低溫低速離心機），取上清液以8000-10000 rpm（低溫高速離心機）離心15 min，沉淀物為線粒體（若不立即測定，可直接放-20℃或-80℃冰箱保存，3個月內可用）。往線粒體中加入0.2-0.3 mL的勻漿介質（推薦0.1 mol/L pH 7-7.4的PBS或生理鹽水），冰水浴條件下超聲破碎（功率：300W，3-5秒/次，間隔30秒，重復3-5次），制備好的勻漿液若比較均勻可不離心直接測定。也可采用裂解液裂解（推薦Triton X-100，1-2%濃度，0.1 mL，裂解30-40 min）,裂解好的液體可不離心直接測定，制備好的勻漿液需要測定其蛋白濃度。
3）細胞樣本前處理：（貼壁細胞）用細胞刮配合等滲PBS刮下或用胰酶消化下來（消化后加入0.5-1 mL等滲PBS沖洗），再將細胞懸液轉移到另一離心管中，1000 rpm，離心10 min，棄上清液，留細胞沉淀；用等滲緩沖液清洗1-2次，同樣1000 rpm，離心10 min，棄上清液，留細胞沉淀（若不立即測定，可直接放-20℃或-80℃冰箱保存，3個月內可用）；往細胞沉淀中加入0.2-0.3 mL的勻漿介質（推薦0.1 mol/L pH 7-7.4的PBS或生理鹽水）（加完勻漿介質后輕輕混勻細胞溶液，使其均勻，吸取少量進行細胞計數；若是破碎后可以測蛋白，則不用細胞計數），冰水浴條件下超聲破碎（功率：300W，3-5秒/次，間隔30秒，重復3-5次）或手動勻漿，制備好的勻漿液若比較均勻可不離心直接測定。也可采用裂解液裂解（推薦Triton X-100，1-2%濃度，0.1 mL，裂解30-40 min），裂解好的液體可不離心直接測定?！咀ⅰ浚航ㄗh細胞數在100萬個以上（細胞越多，測定效果越好）。破碎好的液體可顯微鏡觀察細胞是否破碎完全。
2. 操作方法
1）酶促反應：(試劑一應用液提前5 min在37℃預溫)
表3 加樣方法
| 加樣種類 | 非酶管 | 酶管 |
| 1 mmol/L GSH標準液（mL） | 0.2 | 0.2 |
| 待測血漿（mL） | / | 0.2 |
| 37℃預溫5分鐘 | ||
| 試劑一應用液（mL） | 0.1 | 0.1 |
| 37℃準確反應5分鐘 | ||
| 試劑二應用液（mL） | 2 | 2 |
| 待測勻漿（mL） | 0.2 | / |
| 混勻，3500-4000 rpm，離心10 min，取上清1 mL作顯色反應 | ||
【注】1 mmol/L GSH標準液配制：測定前取1瓶GSH標準品粉末（60746-H）加到10 mL試劑七應用液（標準品溶劑應用液）中，充分溶解配成1 mmol/L GSH標準液，配好后可置于2~8℃保存1-2周。
【注】正式實驗前，請先進行預實驗，預實驗后再進行批量實驗。
2）顯色反應
表4 加樣方法
| 加樣種類 | 空白管 | 標準管 | 非酶管 | 酶管 |
| 標準品溶劑應用液（mL） | 1.0 | / | / | / |
| 20 μmol/L GSH標準液（mL） | / | 1.0 | / | / |
| 上清液（mL） | / | / | 1.0 | 1.0 |
| 試劑四應用液（mL） | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 |
| 顯色劑應用液（mL） | 0.25 | 0.25 | 0.25 | 0.25 |
| 試劑六應用液（mL） | 0.05 | 0.05 | 0.05 | 0.05 |
| 混勻，室溫靜置15 min后，倒入1 cm光徑比色杯中，蒸餾水調零，波長412 nm處，測各管OD值 | ||||
【注】20 μmol/L GSH標準液配制：取 1 mmol/L GSH溶液0.2 mL加標準品溶劑應用液定容至10 mL充分混勻配成，現用現配。
3. 組織中GSH-PX酶活力的計算
a. 定義：每毫克蛋白質在37℃每分鐘，扣除非酶促反應作用，使反應體系中GSH濃度降低1 μmol/L為一個酶活力單位（U）。
【注】組織蛋白的測定：參照實驗方法學中的考馬斯亮蘭法、BCA法、紫外法及磺基水楊酸法測出所取樣本中的蛋白毫克數。
b. 計算公式：
C標準：顯色反應中的GSH標準液濃度，20 μmol/L；
N：酶促反應體系稀釋倍數，5（2.5 mL/0.5 mL，固定值）；
T：反應時間，5 min；
V樣：樣本取樣量，0.2 mL；
Cpr：勻漿液蛋白濃度，mgprot/mL（prot 指蛋白）；
【注】：酶促反應體系如有改變，計算時實際的V樣需乘以體系改變的系數（如酶促反應體系縮小2倍后，取樣0.1 mL，計算時V樣應為0.1 mL×2=0.2 mL）。
3. 組織（勻漿）的最佳取樣濃度摸索舉例
a. 樣本來源：正常小鼠肝組織，加生理鹽水制備成10%的肝勻漿上清待測。
b. 樣本前處理：用生理鹽水將10%肝勻漿稀釋成0.5%、0.4%、0.3%、0.25%、0.2%、0.1%、0.05%濃度，分別取0.2 mL按組織的操作表進行檢測。
c. 測定結果：通過非酶管OD值－酶管OD值在0.2左右時，作為最佳取樣濃度。
三. 全血中GSH－PX活力的測定
1. 樣本前處理（溶血液的配制）
1）取人肝素抗凝全血20 μL，以蒸餾水稀釋至1 mL，配成1：49的溶血液；鼠血10 μL加蒸餾水至1 mL，配成1∶99的溶血液。充分混勻，放置5 min直至使玻璃管中的溶血液對光呈完全透明狀，方可進行檢測。
2）已配好的溶血液中GSH-PX活力只能保持45-60 min，天冷時可延遲至120 min。如果當天來不及測定則以抗凝全血冰箱（2℃-8℃）保存，2-3天內酶活力變化不大。
【注】請在正式實驗前做預實驗。
【注】測溶血液中GSH－PX含量要注意樣品測試前紅細胞一定要充分溶血。（以對光觀察透亮為標準，若不透亮可以凍溶一次，但有部分大鼠及豬的紅細胞是不可放置0℃以下，否則不易溶血，例如糖尿病大鼠和部分正常大鼠的紅細胞凍后很難溶血。在做正式實驗前最好先取1-2只樣本做預實驗。）
2. 操作方法
1）酶促反應：(試劑一應用液提前5 min在37℃預溫)
表5 加樣方法
| 加樣種類 | 非酶管 | 酶管 |
| 1 mmol/L GSH標準液（mL） | 0.2 | 0.2 |
| 待測溶血液（mL） | / | 0.2 |
| 37℃預溫5分鐘 | ||
| 試劑一應用液（mL） | 0.1 | 0.1 |
| 37℃準確反應5分鐘 | ||
| 試劑二應用液（mL） | 2 | 2 |
| 待測溶血液（mL） | 0.2 | / |
| 混勻，3500-4000 rpm，離心10 min，取上清1 mL作顯色反應 | ||
【注】1 mmol/L GSH標準液配制：測定前取1瓶GSH標準品粉末（60746-H）加到10 mL試劑七應用液（標準品溶劑應用液）中，充分溶解配成1 mmol/L GSH標準液，配好后可置于2~8℃保存1-2周。
【注】正式實驗前，請先進行預實驗，預實驗后再進行批量實驗。
2）顯色反應
表6 加樣方法
| 加樣種類 | 空白管 | 標準管 | 非酶管 | 酶管 |
| 標準品溶劑應用液（mL） | 1.0 | / | / | / |
| 20 μmol/L GSH標準液（mL） | / | 1.0 | / | / |
| 上清液（mL） | / | / | 1.0 | 1.0 |
| 試劑四應用液（mL） | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 |
| 顯色劑應用液（mL） | 0.25 | 0.25 | 0.25 | 0.25 |
| 試劑六應用液（mL） | 0.05 | 0.05 | 0.05 | 0.05 |
| 混勻，室溫靜置15 min后，倒入1 cm光徑比色杯中，蒸餾水調零，波長412 nm處，測各管OD值 | ||||
【注】20 μmol/L GSH標準液配制：取 1 mmol/L GSH溶液0.2 mL加標準品溶劑應用液定容至10 mL充分混勻配成，現用現配。
3. 全血中GSH-PX酶活力的計算
a. 定義：每毫升全血在37℃每分鐘，扣除非酶促反應作用，使反應體系中GSH濃度降低1 μmol/L為一個酶活力單位（U）。
b. 計算公式：
C標準：顯色反應中的GSH標準液濃度，20 μmol/L；
N：酶促反應體系稀釋倍數，5（2.5 mL/0.5 mL，固定值）；
T：反應時間，5 min；
V樣：樣本取樣量，0.2 mL；
N樣：全血制備成溶血液過程中的稀釋倍數；
3. 溶血液的最佳取樣濃度摸索舉例
a. 樣本來源：正常組新鮮大鼠尾部肝素抗凝全血。
b. 樣本前處理：分別用蒸餾水將大鼠全血按1︰49、1︰59、1︰69、1︰79、1 ︰89、1︰99、1︰149、1︰199的比例稀釋成不同濃度的溶血液，分別取0.2 mL按全血的操作表進行檢測。
c. 測定結果：通過公式：
，選取抑制率在45%-55%之間的，作為最佳取樣濃度。
四. 預實驗相關事項
- 【注】：空白管、標準管一般只需做1—2只。酶管和非酶管每個樣本都要做。
- 【注】：最佳取樣量及最佳取樣濃度因樣品種類不同，其GSH－PX活力不一，根據酶的百分抑制率與酶的活力呈拋物線關系，各種測定樣品取樣量及取樣濃度不一樣，在每測定一種新的樣品前最好選擇一個最佳取樣量及最佳取樣濃度。
- 最佳取樣濃度的摸索：測試前先預試以確定最佳取樣濃度：當您第一次使用本試劑盒測試某一種新的樣品時最好挑選2例樣本先做三只不同濃度的測試管。例如：測全血，則分別取用蒸餾水1︰24、1︰49、1︰99稀釋的溶血液200 μL進行預實驗；測組織勻漿：則分別取5%、2%、1%等的勻漿200 μL進行預實驗（不同樣本稀釋濃度不同）(動物肝臟中酶活一般較高些)；測血清：則分別取未稀釋的血清及用生理鹽水1︰1、1︰4、1︰9、1︰19稀釋的血清100 μL進行預實驗，然后進行計算：
，結果應該在15%-55%之間，然后取百分抑制率在45%或50%左右的一管作為最佳取樣濃度。因為酶的百分抑制率與酶的活力呈拋物線關系，若百分抑制率大于60%時（曲線的平坦部分），則需將樣品濃度稀釋后再測試。若百分抑制率小于20%時，則需將樣品濃度加大后測試。需要注意的是組織勻漿或其他類似樣本有時本身濁度或顏色有干擾時，預實驗不必通過抑制率計算，這時可以用非酶管OD值－酶管OD值在0.2左右時來判定。若百分抑制率大于60％或小于10％，各個測定組的結果在檢驗中有可能無顯著性差異。
2~8℃避光保存，有效期6個月。