Colorimetric Glutathione Peroxidase (GSH-PX) assay kit 谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)檢測試劑盒（比色法）
產(chǎn)品名稱： Colorimetric Glutathione Peroxidase (GSH-PX) assay kit 谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)檢測試劑盒（比色法）
英文名稱： Colorimetric Glutathione Peroxidase (GSH-PX) assay kit 谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)檢測試劑盒（比色法）
產(chǎn)品編號(hào)： 60746ES
產(chǎn)品價(jià)格： null
產(chǎn)品產(chǎn)地： Yeasen
品牌商標(biāo)： Yeasen
更新時(shí)間： 2026-04-02T17:24:05
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谷胱甘肽過氧化物酶（Glutathione peroxidase，GSH-PX）是機(jī)體內(nèi)廣泛存在的一種重要的催化過氧化氫分解的酶。它特異的催化還原型谷胱甘肽（GSH）對(duì)過氧化氫的還原反應(yīng)，可以起到保護(hù)細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和功能完整的作用。GSH-PX的活性中心是硒半胱氨酸，硒是GSH-PX的必需部分，每克分子酶含4克原子硒。測定GSH-PX的活力可以作為衡量機(jī)體硒水平的一項(xiàng)生化指標(biāo)。
谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）可以促進(jìn)過氧化氫（H2O2）與還原型谷胱甘肽（GSH）反應(yīng)生成H2O及氧化型谷胱甘肽（GSSG），谷胱甘肽過氧化物酶的活力可用其酶促反應(yīng)的速度來表示，測定此酶促反應(yīng)中還原型谷胱甘肽的消耗，則可求出酶的活力。反應(yīng)方程式為：
GSH-PX的活力以催化GSH的反應(yīng)速度來表示，由于這二個(gè)底物在沒有酶的條件下，也能進(jìn)行氧化還原反應(yīng)（稱非酶促反應(yīng)），所以最后計(jì)算此酶活力時(shí)必須扣除非酶促反應(yīng)所引起的GSH減少的部分。
GSH量的測定：GSH和二硫代二硝基苯甲酸作用生成5-硫代二硝基苯甲酸陰離子呈現(xiàn)較穩(wěn)定的黃色，在412 nm處測其吸光度即可計(jì)算出GSH的量。
產(chǎn)品組分
| 組分編號(hào) | 組分名稱 | 組分規(guī)格 | 儲(chǔ)存條件 |
| 60746-A | 試劑一 | 1 mL×1 | 2~8℃，用時(shí)按照100倍比例稀釋配成試劑一應(yīng)用液，現(xiàn)用現(xiàn)配（如取0.1 mL加蒸餾水至10 mL，按需配置即可） |
| 60746-B | 試劑二 | 1 vial | 2~8℃，粉末，每瓶試劑二加蒸餾水85 -88 mL，高溫加熱至完全溶解，然后再與1瓶試劑三混合，配置成試劑二應(yīng)用液 |
| 60746-C | 試劑三 | 25 mL×1 | 2~8℃ |
| 60746-D | 試劑四 | 1 vial | 2~8℃，每瓶加蒸餾水100 mL溶解；溶解時(shí)，可置于37℃環(huán)境中加速溶解（如有需要，不是必須） |
| 60746-E | 顯色劑 | 25 mL×1 | 2~8℃，避光 |
| 60746-F | 試劑六 | 1 vial×2 | 2~8℃，避光；試劑六應(yīng)用液：每瓶加蒸餾水10 mL溶解，溶解后置于2~8℃避光，可保存五天 |
| 60746-G | 試劑七 | 5 mL×1 | 2~8℃，試劑七應(yīng)用液（標(biāo)準(zhǔn)品溶劑應(yīng)用液）配制：用時(shí)按照試劑七∶蒸餾水=1∶9的比例進(jìn)行稀釋配置 |
| 60746-H | GSH標(biāo)準(zhǔn)品 | 1 vial×2 | 2~8℃ |
【注】試劑二應(yīng)用液配置時(shí)：試劑二粉末溶解時(shí)不要用水浴鍋加熱，不要用隔水加熱的方式（因受熱較慢導(dǎo)致溶解困難），最好用能直接加熱的設(shè)備( 如電爐、酒精燈之類的) 加熱，且加熱時(shí)不斷攪拌；試劑二應(yīng)用液配好后為過飽和溶液，室溫靜置冷卻后，如有結(jié)晶，則取上清進(jìn)行實(shí)驗(yàn)即可。
使用說明
一. 血清（血漿）中 GSH-PX 活力的測定
1. 操作方法
- 酶促反應(yīng)：(試劑一應(yīng)用液提前5 min在37℃預(yù)溫)
表1 加樣方法
| 加樣種類 | 非酶管 | 酶管 |
| 1 mmol/L GSH標(biāo)準(zhǔn)液（mL） | 0.2 | 0.2 |
| 待測血清（血漿）（mL） | / | 0.1 |
| 37℃預(yù)溫5分鐘 | ||
| 試劑一應(yīng)用液（mL） | 0.1 | 0.1 |
| 37℃準(zhǔn)確反應(yīng)5分鐘 | ||
| 試劑二應(yīng)用液（mL） | 2 | 2 |
| 待測血清（血漿）（mL） | 0.1 | / |
| 混勻，3500-4000 rpm，離心10 min，取上清1 mL作顯色反應(yīng) | ||
【注】1 mmol/L GSH標(biāo)準(zhǔn)液配制：測定前取1瓶GSH標(biāo)準(zhǔn)品粉末（60746-H）加到10 mL試劑七應(yīng)用液（標(biāo)準(zhǔn)品溶劑應(yīng)用液）中，充分溶解配成1 mmol/L GSH標(biāo)準(zhǔn)液，配好后可置于2~8℃保存1-2周。
- 顯色反應(yīng)
表2 加樣方法
| 加樣種類 | 空白管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 非酶管 | 酶管 |
| 標(biāo)準(zhǔn)品溶劑應(yīng)用液（mL） | 1.0 | / | / | / |
| 20 μmol/L GSH標(biāo)準(zhǔn)液（mL） | / | 1.0 | / | / |
| 上清液（mL） | / | / | 1.0 | 1.0 |
| 試劑四應(yīng)用液（mL） | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 |
| 顯色劑應(yīng)用液（mL） | 0.25 | 0.25 | 0.25 | 0.25 |
| 試劑六應(yīng)用液（mL） | 0.05 | 0.05 | 0.05 | 0.05 |
| 混勻，室溫靜置15 min后，倒入1 cm光徑比色杯中，蒸餾水調(diào)零，波長412 nm處，測各管OD值 | ||||
【注】20 μmol/L GSH標(biāo)準(zhǔn)液配制：取1 mmol/L GSH溶液0.2 mL加標(biāo)準(zhǔn)品溶劑應(yīng)用液定容至10 mL充分混勻配成，現(xiàn)用現(xiàn)配。
【注】正式實(shí)驗(yàn)前，請(qǐng)先進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，預(yù)實(shí)驗(yàn)后再進(jìn)行批量實(shí)驗(yàn)。
2. 血清中GSH-PX酶活力的計(jì)算
a. 定義：每毫升血清在37℃每分鐘，扣除非酶促反應(yīng)作用，使反應(yīng)體系中GSH濃度降低1 μmol/L為一個(gè)酶活力單位（U）。
b. 計(jì)算公式：（液體類的樣本均可按此公式計(jì)算）
C標(biāo)準(zhǔn)：顯色反應(yīng)中的GSH標(biāo)準(zhǔn)液濃度，20 μmol/L；
N：酶促反應(yīng)體系稀釋倍數(shù)，6（2.4 mL/0.4 mL，固定值）；
T：反應(yīng)時(shí)間，5 min；
V樣：樣本取樣量，0.1 mL；
N樣：樣本測試前稀釋倍數(shù)。
3. 血清（血漿）的最佳取樣濃度摸索舉例
a. 樣本來源：正常組大鼠眼眶取全血，肝素抗凝取血漿。
b. 樣本前處理：用生理鹽水將血漿按1︰1、1︰4、1︰7、1︰9、1︰14、1︰19稀釋成一系列不同濃度的血漿，分別取不同濃度血漿 0.1 mL 按血清（血漿）的操作表進(jìn)行檢測。
c. 測定結(jié)果：通過公式：
，選取抑制率在45%-55%之間的，作為最佳取樣濃度。
二. 組織、細(xì)胞、線粒體中GSH－PX活力的測定
1. 樣本前處理
1）準(zhǔn)確稱取待測動(dòng)物組織的重量，按重量(g)：體積(mL)=1:9 的比例，加入9倍體積的生理鹽水，低溫（0-4℃）條件勻漿，3500 rpm，離心10 min，取上清液待測，制備好的勻漿上清液需要測定其蛋白濃度。
2）線粒體制備及前處理：取10%的組織勻漿5-10 mL，以1000-2000 rpm，離心10 min（普通離心機(jī)或低溫低速離心機(jī)），取上清液以8000-10000 rpm（低溫高速離心機(jī)）離心15 min，沉淀物為線粒體（若不立即測定，可直接放-20℃或-80℃冰箱保存，3個(gè)月內(nèi)可用）。往線粒體中加入0.2-0.3 mL的勻漿介質(zhì)（推薦0.1 mol/L pH 7-7.4的PBS或生理鹽水），冰水浴條件下超聲破碎（功率：300W，3-5秒/次，間隔30秒，重復(fù)3-5次），制備好的勻漿液若比較均勻可不離心直接測定。也可采用裂解液裂解（推薦Triton X-100，1-2%濃度，0.1 mL，裂解30-40 min）,裂解好的液體可不離心直接測定，制備好的勻漿液需要測定其蛋白濃度。
3）細(xì)胞樣本前處理：（貼壁細(xì)胞）用細(xì)胞刮配合等滲PBS刮下或用胰酶消化下來（消化后加入0.5-1 mL等滲PBS沖洗），再將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到另一離心管中，1000 rpm，離心10 min，棄上清液，留細(xì)胞沉淀；用等滲緩沖液清洗1-2次，同樣1000 rpm，離心10 min，棄上清液，留細(xì)胞沉淀（若不立即測定，可直接放-20℃或-80℃冰箱保存，3個(gè)月內(nèi)可用）；往細(xì)胞沉淀中加入0.2-0.3 mL的勻漿介質(zhì)（推薦0.1 mol/L pH 7-7.4的PBS或生理鹽水）（加完勻漿介質(zhì)后輕輕混勻細(xì)胞溶液，使其均勻，吸取少量進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)；若是破碎后可以測蛋白，則不用細(xì)胞計(jì)數(shù)），冰水浴條件下超聲破碎（功率：300W，3-5秒/次，間隔30秒，重復(fù)3-5次）或手動(dòng)勻漿，制備好的勻漿液若比較均勻可不離心直接測定。也可采用裂解液裂解（推薦Triton X-100，1-2%濃度，0.1 mL，裂解30-40 min），裂解好的液體可不離心直接測定。【注】：建議細(xì)胞數(shù)在100萬個(gè)以上（細(xì)胞越多，測定效果越好）。破碎好的液體可顯微鏡觀察細(xì)胞是否破碎完全。
2. 操作方法
1）酶促反應(yīng)：(試劑一應(yīng)用液提前5 min在37℃預(yù)溫)
表3 加樣方法
| 加樣種類 | 非酶管 | 酶管 |
| 1 mmol/L GSH標(biāo)準(zhǔn)液（mL） | 0.2 | 0.2 |
| 待測血漿（mL） | / | 0.2 |
| 37℃預(yù)溫5分鐘 | ||
| 試劑一應(yīng)用液（mL） | 0.1 | 0.1 |
| 37℃準(zhǔn)確反應(yīng)5分鐘 | ||
| 試劑二應(yīng)用液（mL） | 2 | 2 |
| 待測勻漿（mL） | 0.2 | / |
| 混勻，3500-4000 rpm，離心10 min，取上清1 mL作顯色反應(yīng) | ||
【注】1 mmol/L GSH標(biāo)準(zhǔn)液配制：測定前取1瓶GSH標(biāo)準(zhǔn)品粉末（60746-H）加到10 mL試劑七應(yīng)用液（標(biāo)準(zhǔn)品溶劑應(yīng)用液）中，充分溶解配成1 mmol/L GSH標(biāo)準(zhǔn)液，配好后可置于2~8℃保存1-2周。
【注】正式實(shí)驗(yàn)前，請(qǐng)先進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，預(yù)實(shí)驗(yàn)后再進(jìn)行批量實(shí)驗(yàn)。
2）顯色反應(yīng)
表4 加樣方法
| 加樣種類 | 空白管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 非酶管 | 酶管 |
| 標(biāo)準(zhǔn)品溶劑應(yīng)用液（mL） | 1.0 | / | / | / |
| 20 μmol/L GSH標(biāo)準(zhǔn)液（mL） | / | 1.0 | / | / |
| 上清液（mL） | / | / | 1.0 | 1.0 |
| 試劑四應(yīng)用液（mL） | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 |
| 顯色劑應(yīng)用液（mL） | 0.25 | 0.25 | 0.25 | 0.25 |
| 試劑六應(yīng)用液（mL） | 0.05 | 0.05 | 0.05 | 0.05 |
| 混勻，室溫靜置15 min后，倒入1 cm光徑比色杯中，蒸餾水調(diào)零，波長412 nm處，測各管OD值 | ||||
【注】20 μmol/L GSH標(biāo)準(zhǔn)液配制：取 1 mmol/L GSH溶液0.2 mL加標(biāo)準(zhǔn)品溶劑應(yīng)用液定容至10 mL充分混勻配成，現(xiàn)用現(xiàn)配。
3. 組織中GSH-PX酶活力的計(jì)算
a. 定義：每毫克蛋白質(zhì)在37℃每分鐘，扣除非酶促反應(yīng)作用，使反應(yīng)體系中GSH濃度降低1 μmol/L為一個(gè)酶活力單位（U）。
【注】組織蛋白的測定：參照實(shí)驗(yàn)方法學(xué)中的考馬斯亮蘭法、BCA法、紫外法及磺基水楊酸法測出所取樣本中的蛋白毫克數(shù)。
b. 計(jì)算公式：
C標(biāo)準(zhǔn)：顯色反應(yīng)中的GSH標(biāo)準(zhǔn)液濃度，20 μmol/L；
N：酶促反應(yīng)體系稀釋倍數(shù)，5（2.5 mL/0.5 mL，固定值）；
T：反應(yīng)時(shí)間，5 min；
V樣：樣本取樣量，0.2 mL；
Cpr：勻漿液蛋白濃度，mgprot/mL（prot 指蛋白）；
【注】：酶促反應(yīng)體系如有改變，計(jì)算時(shí)實(shí)際的V樣需乘以體系改變的系數(shù)（如酶促反應(yīng)體系縮小2倍后，取樣0.1 mL，計(jì)算時(shí)V樣應(yīng)為0.1 mL×2=0.2 mL）。
3. 組織（勻漿）的最佳取樣濃度摸索舉例
a. 樣本來源：正常小鼠肝組織，加生理鹽水制備成10%的肝勻漿上清待測。
b. 樣本前處理：用生理鹽水將10%肝勻漿稀釋成0.5%、0.4%、0.3%、0.25%、0.2%、0.1%、0.05%濃度，分別取0.2 mL按組織的操作表進(jìn)行檢測。
c. 測定結(jié)果：通過非酶管OD值－酶管OD值在0.2左右時(shí)，作為最佳取樣濃度。
三. 全血中GSH－PX活力的測定
1. 樣本前處理（溶血液的配制）
1）取人肝素抗凝全血20 μL，以蒸餾水稀釋至1 mL，配成1：49的溶血液；鼠血10 μL加蒸餾水至1 mL，配成1∶99的溶血液。充分混勻，放置5 min直至使玻璃管中的溶血液對(duì)光呈完全透明狀，方可進(jìn)行檢測。
2）已配好的溶血液中GSH-PX活力只能保持45-60 min，天冷時(shí)可延遲至120 min。如果當(dāng)天來不及測定則以抗凝全血冰箱（2℃-8℃）保存，2-3天內(nèi)酶活力變化不大。
【注】請(qǐng)?jiān)谡綄?shí)驗(yàn)前做預(yù)實(shí)驗(yàn)。
【注】測溶血液中GSH－PX含量要注意樣品測試前紅細(xì)胞一定要充分溶血。（以對(duì)光觀察透亮為標(biāo)準(zhǔn)，若不透亮可以凍溶一次，但有部分大鼠及豬的紅細(xì)胞是不可放置0℃以下，否則不易溶血，例如糖尿病大鼠和部分正常大鼠的紅細(xì)胞凍后很難溶血。在做正式實(shí)驗(yàn)前最好先取1-2只樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。）
2. 操作方法
1）酶促反應(yīng)：(試劑一應(yīng)用液提前5 min在37℃預(yù)溫)
表5 加樣方法
| 加樣種類 | 非酶管 | 酶管 |
| 1 mmol/L GSH標(biāo)準(zhǔn)液（mL） | 0.2 | 0.2 |
| 待測溶血液（mL） | / | 0.2 |
| 37℃預(yù)溫5分鐘 | ||
| 試劑一應(yīng)用液（mL） | 0.1 | 0.1 |
| 37℃準(zhǔn)確反應(yīng)5分鐘 | ||
| 試劑二應(yīng)用液（mL） | 2 | 2 |
| 待測溶血液（mL） | 0.2 | / |
| 混勻，3500-4000 rpm，離心10 min，取上清1 mL作顯色反應(yīng) | ||
【注】1 mmol/L GSH標(biāo)準(zhǔn)液配制：測定前取1瓶GSH標(biāo)準(zhǔn)品粉末（60746-H）加到10 mL試劑七應(yīng)用液（標(biāo)準(zhǔn)品溶劑應(yīng)用液）中，充分溶解配成1 mmol/L GSH標(biāo)準(zhǔn)液，配好后可置于2~8℃保存1-2周。
【注】正式實(shí)驗(yàn)前，請(qǐng)先進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，預(yù)實(shí)驗(yàn)后再進(jìn)行批量實(shí)驗(yàn)。
2）顯色反應(yīng)
表6 加樣方法
| 加樣種類 | 空白管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 非酶管 | 酶管 |
| 標(biāo)準(zhǔn)品溶劑應(yīng)用液（mL） | 1.0 | / | / | / |
| 20 μmol/L GSH標(biāo)準(zhǔn)液（mL） | / | 1.0 | / | / |
| 上清液（mL） | / | / | 1.0 | 1.0 |
| 試劑四應(yīng)用液（mL） | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 |
| 顯色劑應(yīng)用液（mL） | 0.25 | 0.25 | 0.25 | 0.25 |
| 試劑六應(yīng)用液（mL） | 0.05 | 0.05 | 0.05 | 0.05 |
| 混勻，室溫靜置15 min后，倒入1 cm光徑比色杯中，蒸餾水調(diào)零，波長412 nm處，測各管OD值 | ||||
【注】20 μmol/L GSH標(biāo)準(zhǔn)液配制：取 1 mmol/L GSH溶液0.2 mL加標(biāo)準(zhǔn)品溶劑應(yīng)用液定容至10 mL充分混勻配成，現(xiàn)用現(xiàn)配。
3. 全血中GSH-PX酶活力的計(jì)算
a. 定義：每毫升全血在37℃每分鐘，扣除非酶促反應(yīng)作用，使反應(yīng)體系中GSH濃度降低1 μmol/L為一個(gè)酶活力單位（U）。
b. 計(jì)算公式：
C標(biāo)準(zhǔn)：顯色反應(yīng)中的GSH標(biāo)準(zhǔn)液濃度，20 μmol/L；
N：酶促反應(yīng)體系稀釋倍數(shù)，5（2.5 mL/0.5 mL，固定值）；
T：反應(yīng)時(shí)間，5 min；
V樣：樣本取樣量，0.2 mL；
N樣：全血制備成溶血液過程中的稀釋倍數(shù)；
3. 溶血液的最佳取樣濃度摸索舉例
a. 樣本來源：正常組新鮮大鼠尾部肝素抗凝全血。
b. 樣本前處理：分別用蒸餾水將大鼠全血按1︰49、1︰59、1︰69、1︰79、1 ︰89、1︰99、1︰149、1︰199的比例稀釋成不同濃度的溶血液，分別取0.2 mL按全血的操作表進(jìn)行檢測。
c. 測定結(jié)果：通過公式：
，選取抑制率在45%-55%之間的，作為最佳取樣濃度。
四. 預(yù)實(shí)驗(yàn)相關(guān)事項(xiàng)
- 【注】：空白管、標(biāo)準(zhǔn)管一般只需做1—2只。酶管和非酶管每個(gè)樣本都要做。
- 【注】：最佳取樣量及最佳取樣濃度因樣品種類不同，其GSH－PX活力不一，根據(jù)酶的百分抑制率與酶的活力呈拋物線關(guān)系，各種測定樣品取樣量及取樣濃度不一樣，在每測定一種新的樣品前最好選擇一個(gè)最佳取樣量及最佳取樣濃度。
- 最佳取樣濃度的摸索：測試前先預(yù)試以確定最佳取樣濃度：當(dāng)您第一次使用本試劑盒測試某一種新的樣品時(shí)最好挑選2例樣本先做三只不同濃度的測試管。例如：測全血，則分別取用蒸餾水1︰24、1︰49、1︰99稀釋的溶血液200 μL進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)；測組織勻漿：則分別取5%、2%、1%等的勻漿200 μL進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)（不同樣本稀釋濃度不同）(動(dòng)物肝臟中酶活一般較高些)；測血清：則分別取未稀釋的血清及用生理鹽水1︰1、1︰4、1︰9、1︰19稀釋的血清100 μL進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，然后進(jìn)行計(jì)算：
，結(jié)果應(yīng)該在15%-55%之間，然后取百分抑制率在45%或50%左右的一管作為最佳取樣濃度。因?yàn)槊傅陌俜忠种坡逝c酶的活力呈拋物線關(guān)系，若百分抑制率大于60%時(shí)（曲線的平坦部分），則需將樣品濃度稀釋后再測試。若百分抑制率小于20%時(shí)，則需將樣品濃度加大后測試。需要注意的是組織勻漿或其他類似樣本有時(shí)本身濁度或顏色有干擾時(shí)，預(yù)實(shí)驗(yàn)不必通過抑制率計(jì)算，這時(shí)可以用非酶管OD值－酶管OD值在0.2左右時(shí)來判定。若百分抑制率大于60％或小于10％，各個(gè)測定組的結(jié)果在檢驗(yàn)中有可能無顯著性差異。
2~8℃避光保存，有效期6個(gè)月。