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產品描述

MSCgo? Chondrogenic Differentiation Medium間質干細胞成軟骨誘導分化培養基，無血清，無異源成分，即用型，適用于不同來源的hMSC，如骨髓、脂肪組織和臍帶組織（hMSC-BM，hMSC-AT，hMSC-CT）。

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成軟骨結果

hMSC成軟骨分化，細胞會聚集形成3D球狀，同時伴隨細胞外基質有蛋白聚糖 (Aggrecan) 富集的情形。所以可用Alcian Blue（深藍色的含銅染料）染色檢驗蛋白聚糖，作為成熟軟骨形成的指標。不過染色的強度會因不同hMSC來源（類型、年齡、代數）而有差異。

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試劑盒組成

MSCgo?間質干細胞成軟骨誘導分化培養基

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完全培養基配制

1??????室溫下解凍Supplement Mix。

2??????以1：10將Supplement Mix稀釋進Chondrogenic Basal Medium（如：10ml Supplement Mix+90ml?Basal Medium）。

3??????完全培養基可在2-8°C儲存一個月。

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成軟骨實驗所需材料

維持培養基

MSC NutriStem? XF Medium: BI；05-200-1，05-201-1

MSC Attachment solution XF : BI；05-752-1

??注：若您有MSC血清或者其他培養試劑也可使用。

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分化培養基

MSCgo??Chondrogenic?Differentiation Medium：05-220-1B, 05-221-1D

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染色試劑（可選）

可選- Alcian Blue 8 GX（Sigma; A-3157）。建議選擇Vivacell品牌，間充質干細胞成軟骨分化染色試劑盒，貨號：C37B00150。

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成軟骨誘導分化操作

以維持培養基接種hMSC

1.????細胞以1x10⁵/（10μl培養基）接種進1孔U底的96孔盤（非TC-treated）置于37°C，5%?CO₂細胞培養箱2小時后 (促進細胞聚集成團)，小心加入0.1ml培養基。

??此處僅為針對成軟骨誘導的細胞接種操作，MSC NutriStem^??XF Medium詳細操作步驟請參考其說明書。

??小微團的培養方式有助于球狀細胞團形成

2.??放回37°C，5%?CO₂細胞培養箱繼續培養。

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以成軟骨分化培養基誘導分化

1.????培養24小時后，將維持培養基吸除，每孔（96孔盤）加入0.2ml分化培養基

??球狀細胞團會在24-48小時形成

1??????置于37°C，5% CO₂細胞培養箱中培養14-21天；期間每3-4天更換一次分化培養基。

注意：培養時間長，可以得到更多成熟的軟骨細胞（Alcian Blue染色強度更大）。

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Alcian Blue染色操作（可選）

制備1% Alcian Blue 染色工作液

l??將0.2g Alcian Blue 8 GX（Sigma；A-3157）溶解于20ml 0.1N HCl中。

l??用0.45 μm注射器（如：Minisart 16555）過濾。

l??溶液置于2-8°C儲存一年。

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Alcian Blue染色過程

l??吸除培養基，用DPBS洗一次（BI；02-023-1，0.2ml/well）

??注意：小心操作不要吸入球狀體。

l??固定：吸除DPBS，每孔加入0.2ml的10% 福爾馬林（4% 甲醛）。室溫固定30-60分鐘。

l??吸除福爾馬林，每孔用0.2ml 蒸餾水洗滌2次。

l??吸除蒸餾水，每孔加入0.2ml的Alcian Blue染色工作液。室溫避光過夜。

l??吸除染液，每孔用0.2ml 0.1N HCl洗滌2-3次。

l??吸除HCl，每孔加入0.2ml 蒸餾水。

l??觀察成軟骨染色效果，圖像采集，及軟骨形成評估。

??注意：含有蛋白聚糖的軟骨會被染成藍色，不含蛋白聚糖的球形細胞團則否。

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半定量Alcian Blue染色（可選）

l??每孔用0.15ml 8M Guanidine HCH溶液（GuHCl，Sigma；G9284）洗脫染料。

l??2-8°C過夜。

l??600nm?測OD值（8M Guanidine HCH溶液作為空白對照）。

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產品官網鏈接：https://www.bioind.com/worldwide/chondrogenic-differentiation-media/

說明書下載：MSCgo?成軟骨誘導分化試劑英文說明書

說明書下載：MSCgo?成軟骨誘導分化試劑中文說明書