產品說明：

生物素3'末端DNA標記試劑盒(Biotin 3' End DNA Labeling Kit)能夠利用終端脫氧核苷酸轉移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase，TdT)將生物素標記的脫氧尿嘧啶三磷酸(dUTP)添加到DNA分子的3'末端。這種標記的優點是：不干擾雜交反應，不影響EMSA檢測。該試劑盒標記的生物素化DNA探針適用于常見的核酸實驗，包括Northern印跡、Southern印跡、EMSA凝膠遷移位移（也稱為gel shift）、菌落雜交或原位雜交等。

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終端脫氧核苷酸轉移酶(TdT)能夠在不依賴模板的情況下催化DNA分子3'末端與脫氧核苷三磷酸(dNTP)之間的連接反應。在TdT催化下，單鏈DNA分子3'末端與dNTP反應效率最高，其次依次是：3'端末端凸出的雙鏈DNA分子，平端DNA分子。所以，我們盡可能讓DNA處于單鏈的情況下進行標記，特別是對于EMSA實驗，可先單鏈標記再進行退火步驟。

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參照實驗標準步驟標記，每次標記反應的DNA探針量約為5pmol。

本試劑盒特點：

1.??????標記速度快，30分鐘內完成標記；

2.??????避免了使用同位素的危害和污染物的處理；

3.??????標記產物穩定，可以長期存放一年;

4.??????本試劑盒標記產物適合于多種分子生物學實驗，干擾小。

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試劑盒組分：

保存條件：

-20℃保存。

其他需要準備的材料：
? 超純水；

? 待標記DNA（1μM）；

? PCR儀器，水浴鍋或可設置37℃的金屬浴；

? 氯仿/異戊醇Chloroform: isoamyl alcohol (24:1)；

? 吸頭和離心管

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操作說明：
1.?準備工作：

將試劑盒中的各個組分恢復至室溫（TdT酶務必放在-20℃，使用時放在冰盒上）；
待標記的DNA片段調整至1μM；如果DNA為雙鏈，請先變性為單鏈，標記效果會更好。

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2. DNA探針的標記：

以下示例為每次標記5pmol DNA 3'-OH 末端最優配制。Mg²⁺、蛋白質和殘留瓊脂糖的存在可能會降低標記效率。 在以下反應中僅使用純化的 DNA。再次強調： 對于雙鏈 DNA 的標記，需要先將其變性后，標記效果會更好，使用之前將其退火復性。
2.1?按照以下體系配置反應體系

50ul反應體系設置如下：

2.2 配制好以后輕輕混勻反應體系，PCR儀或者水浴鍋上37℃反應30分鐘。

2.3?加入2.5μl標記終止液，輕輕混勻終止反應。

2.4?加入52.5μl氯仿-異戊醇(24:1)，振蕩混勻；12,000-g離心3分鐘。吸取上清即為被生物素標記的DNA探針。

3.?探針的純化(可做步驟)：
標記好的探針可以直接用于實驗，但是為了追求更好是實驗效果，可以按如下步驟進行純化：
3.1? 50ul標記好的探針，加入1/4體積（即12.5μl）的5M醋酸銨，再加入2體積（100μl）的冰凍無水乙醇，輕輕混勻；
3.2 ?-20℃沉淀過夜；
3.3 ?4℃，12,000g離心30分鐘；離心完畢后，小心去除上清，保留沉淀，微晾干沉淀；
3.4? 加入25μl?TE，待其完全溶解沉淀；標記好的探針可以放在-20℃保存。