MMLV(RNase H-)逆轉錄酶
產品名稱： MMLV(RNase H-)逆轉錄酶
英文名稱： MMLV (RNase H-)Reverse Transcriptase
產品編號： Z60905
產品價格： 0
產品產地： 中國
品牌商標： 雅吉生物
更新時間： null
使用范圍： null
- 聯系人 :
- 地址 : 上海市閔行區元江路5500號第1幢5658室
- 郵編 :
- 所在區域 : 上海
- 電話 : 158****3937 點擊查看
- 傳真 : 點擊查看
- 郵箱 : yajikit@163.com
1.?延伸性能好，可合成長達?12.5?Kb?的全長?cDNA。
2.?最佳反應溫度為?42℃，但在?50℃時仍有活性，70℃10?分鐘能使其失活。
3.?能?以??Cy3-，Cy5-，rhodamine-， ?aminoallyl-，fluorescein??等?標?記?的
4.?可用于?first?strand?cDNA?合成，second?strand?cDNA?合成，DNA labeling，RNA?primer?extension?等。
5.?與?PCR?兼容，RT?產物可以用于?PCR?和?Real-time?PCR。
6.?能被金屬螯合劑，無機磷酸，焦磷酸和多胺抑制。
沒有?RNase?H?活性。
?
|
成 份 |
編號 |
塑料袋包裝 |
|
MMLV?逆轉錄酶，200U/μL |
60905a |
50?μL（綠蓋） |
|
5×RT Buffer |
60905b |
1 mL（本色蓋） |
|
使用手冊 |
60905sc |
1 份 |
?
|
運輸及保存 |
低溫運輸，-20℃保存，有限期一年 |
|||
|
使用方法 |
一：合成 PCR 用的 1st-strand cDNA 1. 按下表配制 RT 反應體系: |
|||
|
? |
? |
成分 |
加入量 |
|
|
? |
? |
自備 RNA 模板 |
? |
|
|
? |
? |
總 RNA |
100-500 ng |
|
|
? |
? |
或 poly(A) mRNA |
10-500 ng |
|
|
? |
? |
或專一的 RNA |
0.01pg-500ng |
|
|
? |
? |
注意：RNA 樣品不能有基因組 DNA 污染。 |
||
|
? |
? |
自備引物 |
? |
|
|
? |
? |
Oligo?(dT)18(0.5ug/μL) |
1?μL |
|
|
? |
? |
或隨機引物(0.2ug/μL) |
1?μL |
|
|
? |
? |
或 RNA 模板專一性引物 |
15-20pmol |
|
?
|
|
注意：隨機引物于 ?RNA ?模板的比例跟最后得到的 cDNA ?的平均長度成反比。 |
? |
|
|
? |
自 備 RNase-free 水 |
補水到?12?μL |
? |
|
2.?70℃保溫?5?分鐘后立即冰浴。 3.?再嚴格按下表順序加入各成分： 5×RT?Buffer 4?μL 自備?RNase?Inhibitor?(20U/μL) 1??μL自備?dNTP?(10?mM?each)2?μL 4.?37℃保溫?5?分鐘。對富含二級結構的高?GC?RNA 模板，可以改成 45℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機引物，則保溫溫度只能是 25℃（5 分鐘）。 5.?加入?1??μL?(=200?U)?MMLV?逆轉錄酶，反應終體積為?20μL。 6.?42℃保溫?60?分鐘（但如果使用隨機引物，需要先?25℃保溫?10?分鐘，?然后再轉移到?42℃保溫?60?分鐘）。 7.?70℃保溫?10?分鐘以終止反應，放置在冰上待用。合成的?cDNA?可以直接作為?PCR?模板使用，不需要純化。 二：合成建文庫用的 1st-strand cDNA 1.?按下表配制?RT?反應體系: 2.?70℃保溫?5?分鐘后立即冰浴。 3.?嚴格按下表順序加入各成分： 4.?37℃保溫?5?分鐘。對富含二級結構的高?GC?RNA 模板，可以改成 45℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機引物，則保溫溫度只能是 25℃（5 分鐘）。 5.?加入?1??μL?(=200?U)?MMLV?逆轉錄酶，反應終體積為?20μL。 6.?42℃保溫?60?分鐘（但如果使用隨機引物，需要先?25℃保溫?10?分鐘，?然后再轉移到?42℃保溫?60?分鐘）。 7.?70℃保溫?10?分鐘以終止反應，放置在冰上待用。合成的?cDNA?可以 ? 用于第二鏈?cDNA 的合成或放置在-20℃。 儲存?Buffer：50?mM?Tris-HCl?(pH?8.3)，0.1?M?NaCl，1
| |||