【實驗原理】

采用藍光光源照射人永生化角質形成細胞HaCaT，會出現一定的細胞毒性，抑制細胞增殖。藍光波長比紫外線長，具有較強的穿透力，能夠穿透皮膚表皮抵達真皮層，因此會影響皮膚屏障相關基因的表達，并使細胞產生氧化應激反應生成過量ROS，從而引起一系列的炎癥反應和線粒體損傷，最終誘導細胞的凋亡甚腫瘤的發生。

【實驗方法】

對人永生化表皮細胞HaCaT進行藍光照射3h后，

1、計算添加和不添加受試物對于細胞的保護比率，若保護率≥1.5，則滿足受試物對皮膚抵抗藍光有防護作用。

2、檢測皮膚屏障相關基因TGM1相對表達量

3、統計活性氧自由基數量，換算其清除作用。

4、檢測炎癥因子IL-1α、IL-6、IL-8或TNFα的分泌量。

5、拍攝線粒體膜電位熒光照片

【評價指標】

1、細胞活性保護比率；

2、皮膚屏障相關基因表達TGM1相對表達量；

3、ROS清除作用；

4、炎癥因子IL-1α、IL-6、IL-8、TNFα分泌量；

5、線粒體膜電位的改變。

【結果展示】（展示圖片僅供參考，實際實驗組別依據合同而定）

1、細胞活性保護比率：提供細胞活性保護比率A值

2、皮膚屏障相關基因表達TGM1相對表達量：提供柱狀圖

3、ROS清除作用：提供柱狀圖

圖2. ROS相對含量

4、炎癥因子IL-1α：提供柱狀圖（以IL-1α為例）

圖3. IL-1α相對含量

5、線粒體膜電位：提供熒光圖片

圖4. 線粒體膜電位效果圖

正常細胞（vehicle）線粒體膜電位較高，熒光探針以聚合物形式存在于線粒體中，呈明亮的紅色熒光，而細胞中的綠色熒光很弱；使用細胞凋亡誘導劑CCCP處理后線粒體膜電位下降，熒光探針不能以聚合物形式存在線粒體中，而是以單體形式存在于細胞漿中，此時線粒體內紅色熒光強度顯著降低，而細胞漿中綠色熒光顯著增強。

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