產品簡介

Tn5轉座酶特異性識別轉座子兩端反向重復的ME序列(Mosaic End)，形成轉座復合體后隨機的將轉座子插入靶DNA中。Protein G 偶聯轉座酶(Protein G-Tn5)，即通過將Protein G與改造的超高活性Tn5轉座酶融合，形成兼具雙重活性的新型融合酶(pG-Tn5 Transposase)，可在抗體引導下精準靶向切割目的蛋白附近的DNA序列，適用于CUT&Tag (Cleavage Under Targets and Tagmentation)技術。CUT&Tag是替換傳統的ChIP-Seq用以研究蛋白質-基因組互作的新技術，與后者相比，它具有顯著優勢，如：信噪比高，可重復性好，實驗周期短（1天實現從細胞到文庫構建），細胞投入量低等，該方法適用于表觀遺傳學、腫瘤、干細胞等研究領域。

組分信息

儲存條件

pG-Tn5 Transposase于-85~-65℃保存，其余組分可于-25~-15℃保存，有效期1年。

注意事項

1. 轉座酶對溫度敏感，建議盡快完成接頭包埋，生成的轉座子可于-25~-15℃保存，有效期1年。

2. 本產品僅作科研用途。

3. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。

使用說明

以高通量測序建庫為例，在使用前，請務必仔細閱讀使用說明。

1. 接頭制備

1）Illumina平臺參考引物名稱及序列：

 Primer A：5'-phos-CTGTCTCTTATACACATCT-NH2-3'

 Primer B：5′-TCGTCGGCAGCGTCAGATGTGTATAAGAGACAG-3′

 Primer C：5′-GTCTCGTGGGCTCGGAGATGTGTATAAGAGACAG-3′

2）使用Annealing Buffer溶解Primer A、Primer B、Primer C至100 μM。

3） 分別配制如下反應體系：

4）分別將反應1和反應2渦旋振蕩充分混勻，并短暫離心使溶液回到管底。置于PCR儀內，進行如下反應程序：熱蓋105℃ On，94℃加熱2 min。時間到后，停止反應程序，不要打開熱蓋，讓PCR管在PCR儀器中自然冷卻2 h，然后再于4℃中放置5 min。

5）反應結束后，將反應1和反應2等體積混合，混勻。命名為Adapter Mix，-25~-15℃保存。

2．轉座子生成

1） 配置以下反應體系：

2）反應條件：使用移液器輕輕吹打充分混勻。置于25℃反應1 h（熱蓋關閉）。反應產物命名為pG-Tn5 Mix，可直接應用于建庫實驗，或-25~-15℃保存。

3. DNA片段化測試

1）配置以下反應體系：

*DNA 使用量越大，片段化產物平均長度越長；反之，片段化產物平均長度越短。

**如需提高打斷程度，可提高pA-Tn5 Mix使用量；反之，可減少酶使用量。

2）片段化反應程序

輕輕吹打或振蕩混勻，短暫離心。按照下表所示反應程序，進行片段化反應。

3）DNA片段化終止

配置以下反應體系，在上述片段化產物中添加下表中各反應組分，使用移液器輕輕吹打20次混勻。

按照下表所示反應程序，進行終止反應。

待樣品溫度降到4°C后，取出PCR管，進行片段化產物純化，可以選擇1.2×磁珠純化，推薦使用Hieff NGS® DNA Selection Beads（Cat#12601ES），最終使用21 μL ddH₂O洗脫片段化產物。請勿使用TE等含金屬離子絡合劑的緩沖液洗脫片段化產物！

4）片段化產物質量控制

a. 使用 Qubit 進行濃度測定。

b. 使用 Agilent Technologies 2100 Bioanalyzer 進行長度分布檢測。

5）片段化產物擴增

可根據具體的實驗目的與測序平臺選擇合適的試劑進行擴增實驗。

Ver.CN20241230