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隨著代謝表觀遺傳學的不斷發展，組蛋白翻譯后修飾的研究正在從是否發生修飾逐步轉向修飾水平如何動態變化。其中，組蛋白丙二酰化作為連接細胞代謝與染色質調控的重要修飾類型，其定量分析已成為蛋白質組學與表觀遺傳學交叉領域的研究熱點。相比乙酰化或甲基化修飾，Kmal具有更明顯的代謝依賴性和動態變化特征，因此僅依賴定性鑒定已無法滿足研究需求，必須借助高精度質譜技術與系統化定量策略進行深入解析。

一、為什么必須定量分析組蛋白丙二酰化？

在表觀遺傳調控研究中，修飾是否存在只是基礎信息，更關鍵的是其豐度變化所反映的生物學意義。組蛋白丙二酰化的定量分析主要具有以下幾個方面的重要價值。它能夠直接反映細胞代謝狀態的變化。例如，當脂肪酸合成通路被激活時，細胞內丙二酰輔酶A水平升高，從而導致Kmal修飾水平上升。Kmal水平變化可以用于揭示細胞對外界刺激的響應機制，包括缺氧、營養變化或氧化應激等條件。此外，在疾病研究中，Kmal定量有助于區分腫瘤與正常組織之間的表觀遺傳差異，從而為潛在生物標志物的發現提供依據。在藥物研究中，Kmal水平的變化可作為評價代謝干預或表觀遺傳調控藥物效果的重要指標。因此，從本質上來看，Kmal定量分析不僅是技術問題，更是連接代謝狀態與基因表達調控的重要橋梁。

目前，組蛋白丙二酰化的定量分析主要依賴質譜驅動的蛋白質組學技術。整體實驗流程通常包括組蛋白提取、肽段制備、修飾富集、質譜檢測以及數據分析五個核心環節。在這一過程中，定量策略主要分為無標記定量、同位素標記定量以及靶向定量三大類，不同策略適用于不同研究規模與精度需求。

二、樣本制備

組蛋白定量分析的第一步是高質量樣本制備。通常需要從細胞或組織中提取高純度組蛋白。常用方法包括酸性提取和核蛋白分離。其中酸性提取通常使用0.2 M鹽酸溶液，以有效富集組蛋白組分。在提取過程中，必須盡量避免非組蛋白蛋白質污染，因為這會直接影響后續質譜定量的準確性。同時，還需注意保持修飾狀態的穩定性，避免在處理過程中發生去酰化反應。

三、Kmal富集策略

由于組蛋白丙二酰化在細胞內的豐度相對較低，因此在質譜分析前通常需要進行富集處理，以提高檢測靈敏度。目前應用最廣泛的方法是基于抗體的免疫富集策略。該方法利用抗Kmal特異性抗體對修飾肽段進行選擇性捕獲，從而提高目標信號的占比。該策略具有較高的特異性，適用于復雜生物樣本分析，但其定量結果可能受到抗體批次差異的影響。此外，部分研究也嘗試采用化學富集方法，通過修飾基團的化學特性實現選擇性富集，但目前仍處于方法優化階段。

四、質譜定量策略

1、無標記定量（Label-free Quantification）

無標記定量是目前應用最廣泛的Kmal定量方法之一，其基本原理是通過比較不同樣本中肽段的質譜信號強度實現相對定量。在實際分析中，肽段的峰面積與其豐度呈正相關關系，因此可以通過信號強度變化反映Kmal水平差異。該方法的優勢在于無需同位素標記，實驗流程簡單且成本較低，適合大規模樣本分析。但其對儀器穩定性要求較高，且容易受到批次效應影響。

2、同位素標記定量（SILAC與TMT）

同位素標記定量方法通過引入穩定同位素實現不同樣本的混合分析，從而提高定量精度。SILAC方法通常應用于細胞培養體系，通過在培養基中加入輕重氨基酸，實現蛋白質的代謝標記。這種方法具有較高的定量準確性，適用于細胞水平動態研究。TMT標記則是一種更高通量的定量策略，可以同時分析多個樣本。通過在質譜分析中釋放報告離子實現相對定量，非常適合大規模樣本隊列研究。

3、靶向定量（PRM/SRM）

當研究聚焦于特定Kmal位點時，靶向定量方法具有明顯優勢。PRM方法通過高分辨質譜對目標肽段進行選擇性監測，具有較高的靈敏度和特異性，可用于驗證候選修飾位點或生物標志物。該方法還可用于絕對或準絕對定量分析，在臨床轉化研究中具有重要應用價值。

五、數據分析

在完成質譜檢測后，需要對數據進行系統化分析，以實現從信號到生物學意義的轉化。首先，通過峰面積或信號強度對肽段進行定量計算，不同方法對應不同的定量模型。隨后，需要進行數據歸一化處理，以消除不同樣本間的系統誤差，包括總離子流歸一化和中位數歸一化等方法。在位點層面分析中，需要進一步解析具體賴氨酸修飾位點的定量變化，這一步對于理解Kmal功能尤為關鍵。

組蛋白丙二酰化的定量分析已經從基礎檢測階段逐步邁向高精度動態解析階段。當前主流技術以質譜為核心，并結合多種定量策略，實現從蛋白水平到位點水平的系統分析。隨著高分辨質譜技術、人工智能數據分析以及多組學整合的發展，Kmal定量研究將在揭示代謝與表觀遺傳調控機制方面發揮越來越重要的作用。百泰派克生物科技基于蛋白質組學與表觀遺傳修飾分析平臺，提供覆蓋全流程的技術支持服務。

百泰派克生物科技特色項目

一、蛋白測序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統對蛋白質序列進行分析，提供基于質譜的蛋白測序分析服務，包括對蛋白質的氨基酸組成分析，N端測序，C端測序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白質N端序列分析服務。對于未知理論序列的蛋白質，提供基于從頭測序法的蛋白質從頭測序服務，對蛋白序列進行分析。

※服務優勢：

1.采用目前世界上先進的質譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實現對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;

4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測;

6.測序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、蛋白質組學

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質譜平臺結合Nano-LC，提供定量蛋白質組學、靶向蛋白質組學、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種蛋白質組學分析服務。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白質組學服務，助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫學及高通量修飾組學等研究工作。

※服務優勢：

1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規模實驗分析，發現新的生物標記物;

2.體內體外多種蛋白質標記方法，適用于分析組織、細胞、血液等多種樣品;

3.質譜分析靈敏度高，實驗結果重復度高;

4.可檢測較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.專業生物信息學分析，分析更系統準確。

三、單細胞質譜流式技術分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質譜流式系統進行單細胞質譜流式技術分析，采用金屬元素標記物（通常是金屬元素標記的特異抗體）標記細胞表面和內部的分子，然后用流式細胞原理分離單個細胞，再用電感耦合等離子體質譜（ICP-MS）分析單個細胞的原子質量譜，最后將原子質量譜數據轉換為細胞表面和內部的信號分子表達量。

※服務優勢：

1.技術先進，填補技術空白

采用金屬標記抗體技術，避免了傳統流式熒光通道少且易相互影響的問題。可在單細胞層面上對多種指標同時進行表征，百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。

2.分析數量大，成本較低

單細胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細胞匯總的分析數目一般在2x10^4個左右，而流式質譜技術一次（單樣本）就可分析至少10^5的細胞，實現了數量級的提高，且成本不高于單細胞RNAseq。

3.應用前景大

①流式質譜結果可以給出細胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標簽技術與其他技術結合會有新應用方向。除常規蛋白外，質譜流式細胞技術還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現

百泰派克生物科技的基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析，可從最小的樣品材料中進行可重復的識別和定量。該服務可以應用于大規模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質譜技術，MALDI TOF，高效色譜分離技術，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從蛋白質、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結構分析，到產品變異性和純度分析。旨在提供優質生物藥物分析服務，幫助生物醫藥生產商提高生物藥物品質。

百泰派克生物科技七大檢測平臺

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質譜多組學優質服務商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫療器械行業提供質量控制檢測和項目驗證等專業服務。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規和指導原則，通過CNAS/ISO9001雙重質量體系認證，建立了完備的質量體系，數據冷熱/異地備份，設備定期計量/期間核查，軟件審計追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術服務，支持新藥研發、藥物申報注冊和生產放行。

1.公司采用ISO9001質量控制體系，專業提供以質譜為基礎的CRO檢測分析服務；

2.獲國家CNAS實驗室認可，為客戶提供符合全球藥政法規的藥物質量研究服務；

3.業務范圍覆蓋蛋白質組學、多肽組學、代謝組學、生物藥物表征、單細胞分析、單細胞質譜流式、生信云分析以及多組學生物質譜整合分析等；

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5.服務3000+企業，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優質的生物質譜分析服務!

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