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總糖含量檢測試劑盒說明書
微量法
注意：正式測定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定。
英文名稱：Total sugar content test kit
關(guān)鍵詞：總糖含量檢測|總糖含量測定|總糖含量|總糖
貨號：BC2715
規(guī)格：100T/96S
產(chǎn)品內(nèi)容：
試劑一：液體 100mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：液體 100mL×1 瓶，4℃保存；
試劑三：液體 5mL×1 瓶，4℃避光保存；
標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑×1 支，10mg 無水葡萄糖，4℃保存；臨用前加 1mL 蒸餾水溶解為 10mg/mL 的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品備用。

產(chǎn)品說明：
糖類物質(zhì)是構(gòu)成植物體的重要成分之一，也是新陳代謝的主要原料和貯存物質(zhì)。總糖主要指具有還原性的葡萄糖，果糖，戊糖，乳糖和在測定條件下能水解為還原性的單糖的蔗糖，麥芽糖以及可能部分水解的淀粉。
總糖酸水解為還原糖，還原糖在堿性條件下與 DNS 試劑共熱后被還原成氨基化合物，在堿性溶液中呈桔紅色，還原糖的量與桔紅色物質(zhì)顏色的深淺成正比關(guān)系，以此測定樣品中的總糖含量。

試驗(yàn)中所需的儀器和試劑：
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研缽、蒸餾水。

操作步驟：
一、樣品中總糖的提取：
組織：稱取約 0.1g 樣品，加入 1mL 試劑一，1.5mL 蒸餾水，勻漿，沸水浴 30min，加入 1mL
試劑二，混勻，用蒸餾水定容至 10mL，8000g 25℃離心 10min，取上清液待測。（注意稀釋，見注意事項(xiàng)）
血清（漿）、液體體積：取 0.1mL 血清（漿），加入 0.1mL 試劑一，0.15mL 蒸餾水，勻漿，沸水浴 30min，加入 0.1mL 試劑二，混勻，用蒸餾水定容至 1mL，8000g 25℃離心 10min，取上清液待測。（注意稀釋，見注意事項(xiàng)）
二、測定操作表：
1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 540nm，蒸餾水調(diào)零。
2、標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備：將標(biāo)準(zhǔn)品用蒸餾水稀釋至 1.5、1、0.8、0.6、0.5、0.4、0.2、0.1mg/mL。
3、加樣表：
試劑（μL） 空白管 測定管 標(biāo)準(zhǔn)管
蒸餾水???????30
樣本????????????????30
標(biāo)準(zhǔn)品 ????????????????????30
試劑三 ??????30?????30 ????30
混勻，沸水浴 10min（蓋緊，以防止水分散失），冷卻至室溫
蒸餾水 ??????180 ???180 ???180
混勻，取出 200μL 在 540nm 下測定吸光值，并計(jì)算?A 測=A 測定管-A 空白管、?A 標(biāo)=A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管。
三、總糖含量計(jì)算：
1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：
以標(biāo)準(zhǔn)管的濃度為x軸，對應(yīng)的?A標(biāo)為y軸繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到標(biāo)準(zhǔn)方程y=kx+b，將?A測帶入方程中計(jì)算得x（mg/mL）。
2、按樣本鮮重計(jì)算：
總糖（mg/g 鮮重）=（x×V 樣總）÷W×稀釋倍數(shù)=10×x÷W×稀釋倍數(shù)
3、按血清（漿）、液體體積計(jì)算：
總糖（mg/mL）=（x×V 提）÷V 樣×稀釋倍數(shù)=10×x×稀釋倍數(shù)
V 樣總：組織樣本總體積，10mL；
W：樣本鮮重，g；
V 提：血清或液體樣本總體積，1mL；
V 樣：血清或液體體積，0.1mL。

注意事項(xiàng)：
1、空白管只需做一管。
2、如果?A 大于 1.2，需要將上清液用蒸餾水稀釋，計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
3、此試劑盒對于纖維素的分解程度無法達(dá)到 100%。
注意：最低檢測限為 5mg/g 鮮重。