「DIFF CRO」助力基孔肯雅熱病毒（CHIKV）創新藥研發，提供整合型解決方案

基孔肯雅熱假病毒中和抗體檢測

「DIFF CRO」提供基于CPE法的中和抗體檢測服務（圖1），該檢測方法靈敏度高、檢測迅速，并且該實驗方法的特異性、重復性均能滿足中和實驗的要求，適用于高通量樣本的檢測。

圖1. 基孔肯雅熱假病毒中和抗體檢測流程圖

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服務內容

表1.CHIKV血清中和抗體檢測服務

針對基孔肯雅熱假病毒的蛋白酶抑制劑篩選

新型基孔肯雅熱病毒蛋白酶抑制劑的發現對于抗基孔肯雅熱病毒藥物研發至關重要，其蛋白酶抑制劑靶點為nsP2半胱氨酸蛋白酶。在大量化合物中尋找CHIKV蛋白酶抑制劑的過程中，行業急需一種可實現無需活病毒參與的細胞水平的正向篩選方式，以助力新藥研發。

由「DIFF CRO」開發的蛋白酶抑制劑篩選系統，可在細胞水平直接模擬病毒自然感染過程，杜絕漏篩和假陽性等情況。我們以檢測和篩選SARS—COV—2藥物為例，展示「DIFF CRO」的蛋白酶抑制劑篩選系統的一系列優勢：

1）最簡便-肉眼觀測

DIFF蛋白酶抑制劑篩選系統可通過肉眼直接觀察藥物反應的熒光變化（圖2），進行定性判斷。

圖2. SARS—COV—2陽性藥物GC376添加不同濃度SARS—COV—2的3CL蛋白酶抑制劑后24h,48h,72h細胞GFP表達情況

2）最準確

原理可靠

本系統基于特制質粒的共表達機制，以SARS—COV—2為例，結合重組綠色熒光蛋白（rGFP）和SARS—COV—2的3CL蛋白酶。在該系統中，rGFP序列中嵌入了3CL蛋白酶的特異性切割位點。當3CL蛋白酶功能正常時，會特異性裂解rGFP，導致其熒光功能喪失，熒光強度減弱。相反，當抑制劑有效抑制了3CL蛋白酶的活性時，rGFP無法被切割，維持其完整性并正常發出熒光，熒光強度增強（圖3）。藥物有效性與熒光強度成正相關，是一種更直觀的正向篩選方式。

圖3. DIFF蛋白酶抑制劑篩選系統原理圖

結果準確

系統實驗結果與真病毒檢測結果高度一致。使用活病毒進行檢測，GC376的IC50值為4.69μM；而采用DIFF篩選系統，IC50值為6.44μM，兩種方法測得的IC50值高度相近（圖4,5）。

圖4. 使用活病毒和DIFF篩選系統測得的IC50值

圖5. 添加不同濃度SARS—COV—2蛋白酶抑制劑72h后熒光檢測值

3）可進行高通量篩選

系統檢測的熒光值低而信噪比好，可聯合現有藥物庫，一周即可篩選1-10萬個基孔肯雅熱病毒藥物候選化合物，快速鎖定有效藥物（圖6）。

圖6. 高通量篩選操作示意圖