一、石蠟包埋

1. 取材

l 固定要及時  主要取之于活組織檢查標本、動物模型組織標本、解剖標本均為新鮮組織夾取標本時用無齒鑷以免對組織造成人為損傷，如機體死亡2h以上的組織可能有不同程度的自溶，其抗原可能發生變性、消失或嚴重彌漫現象，因此需要快速固定處理以免影響免疫組織化學標記效果。

l 刀具要鋒利  防止人為因素影響切取標本是應用鋒利的刀剪。

l 大小適宜  一般標本取的組織塊厚度約為0.2~0.3cm，可根據性的略作調整，大小以1.5cm*1.5cm*0.2~0.3cm為宜，應于免疫組化的組織以1cm*1cm*0.2cm為好，不要太大，以免浪費試劑。

l 速度要快  取材時間要短，一些特殊的組織取材前要先灌注，比如腦組織。

l 特殊處理  取材應避免取過多壞死組織或凝血塊，組織上如果有血液、粘液、糞便等污物要先處理干凈在取材，以免影響后期切片。

2. 組織固定

l 適宜的固定液  固定組織是要注意固定液的量，一般情況下要求固定液的量應為組織的10倍以上，大標本不少于8倍。

l 適宜的時間  大多數組織應該在固定24h內（不超過48h）進行取材，脫水，如果固定時間過長會影響后續實驗的結果（如免疫組化、免疫熒光，分子生物學、細胞遺傳等）。

l 適宜的取材  根據組織快的大小決定固定時間，一般厚度不超過0.3cm的情況下固定時間為3-24h（如果組織固定好未及時脫水處理應保存在70%的酒精里）。

l 適宜的容器  固定的容器要相對大一些，防止固定后的組織大于容器難以取出，造成組織結構的破壞。

l 特殊組織的固定  肺、脂肪組織在固定的時候要用紗布或棉花把組織壓住，讓組織漂在固定液中間，得到充分的固定；胃、腸、皮膚等剖開的組織要先壓平在固定；腦組織要先灌注再取材。注：所有的組織后期如果要做免疫方面的實驗盡量先灌注，以免紅細胞太多影響實驗結果的判讀。

二、石蠟切片制作流程

1. 取材：新鮮組織固定于 4%多聚甲醛 24h 以上。將組織從固定液取出在通風櫥內用手術刀將目的部位組織修平整，將修切好的組織和對應的標簽放于脫水盒內；

2. 脫水：將脫水盒放進吊籃里于脫水機內依次梯度酒精進行脫水。75%酒精 1h-85%酒精 1h-95%酒精 1h-95%酒精 1h-無水乙醇 I 1h-無水乙醇 II 1h-二甲苯Ⅰ 1h-二甲苯 Ⅱ 1h-蠟 I 1h-蠟 II 1h；

3. 包埋：將浸好蠟的組織于包埋機內進行包埋。先將融化的蠟放入包埋框，待蠟凝固之前將組織從脫水盒內取出按照包埋面的要求放入包埋框，于-20°凍臺冷卻，蠟凝固后將蠟塊從包埋框中取出并修整蠟塊。

4. 切片：將修整好的蠟塊，放入-20℃凍臺冷卻，再將冷卻的蠟塊置于石蠟切片機切片，厚4μm。切片漂浮于攤片機40℃ 溫水上將組織展平，載玻片將組織撈起，60℃ 烘箱內烤片。水烤干蠟烤化后取出常溫保存備用。

三、HE染色實驗步驟

1. 石蠟切片脫蠟至水：依次將切片放入二甲苯Ⅰ8min-二甲苯Ⅱ8min-無水乙醇Ⅰ 6min-無水乙醇Ⅱ6min-95%酒精 6min-85%酒精 6min-75%酒精 5min-流水沖洗；

2. 蘇木素染細胞核：切片入 Harris 蘇木素染 3-8min，自來水洗，分化液分化數秒，自來水沖洗，流水返藍；

3. 伊紅染細胞質：切片入伊紅染液中染色 1-3min；

4. 脫水封片：將切片依次放入75%酒精 30s-85%酒精 30s- 95%酒精 I 1min -95%酒精 II 2min-無水乙醇Ⅰ5min -無水乙醇Ⅱ5min -二甲苯Ⅰ5min -二甲苯Ⅱ7min 中脫水透明，將切片從二甲苯拿出來稍晾干， 中性樹膠封片；

5. 顯微鏡鏡檢，圖像采集分析。

染色結果判讀：細胞核藍色，細胞質紅色。