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細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)

當(dāng)單個(gè)細(xì)胞在體外增殖6代以上，其后代所組成的細(xì)胞群體，成為集落或克隆。每個(gè)克隆含有50以上的細(xì)胞，大小在0.3-1.0mm之間。集落形成率表示細(xì)胞的獨(dú)立生存能力。各種理化因素可能導(dǎo)致細(xì)胞的克隆形成能力發(fā)生改變。通過一定的實(shí)驗(yàn)方法可以對(duì)細(xì)胞的克隆形成能力進(jìn)行檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)方法

平板集落形成實(shí)驗(yàn)、軟瓊脂集落形成實(shí)驗(yàn)

(a)?平板集落形成實(shí)驗(yàn)：本法適用于貼壁生長的細(xì)胞和正常培養(yǎng)的細(xì)胞

(b)?軟瓊脂集落形成實(shí)驗(yàn)：本法適用于非錨著依賴性生長的細(xì)胞，如骨髓造血干細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞株、轉(zhuǎn)化細(xì)胞系。

注意事項(xiàng)

(a)?瓊脂對(duì)熱和酸不穩(wěn)定，若反復(fù)加熱，容易降解而產(chǎn)生毒性，且硬度下降。因此高壓滅菌后應(yīng)進(jìn)行分裝；

(b)?細(xì)胞在進(jìn)行克隆形成實(shí)驗(yàn)時(shí)要求有95%以上的分散度，否則結(jié)果的準(zhǔn)確度會(huì)受到很大影響；

(c)?軟瓊脂與細(xì)胞混合時(shí)溫度不能超過40℃，否則將會(huì)燙傷/死細(xì)胞；

(d)?接種時(shí)細(xì)胞密度適度，不可過高。

細(xì)胞在低密度、非貼壁狀態(tài)條件下培養(yǎng)，生存率明顯下降，永生細(xì)胞系/株克隆形成率可達(dá)到10%以上，但初代培養(yǎng)細(xì)胞和有限傳代細(xì)胞系克隆形成率僅為0.5%-5%，甚至無法形成單個(gè)克隆。因此，為了提高克隆形成率，有時(shí)需要在培養(yǎng)基中添加胰島素、地塞米松等促克隆形成物質(zhì)。

細(xì)胞接種存活率只表示接種細(xì)胞后貼壁的細(xì)胞數(shù)，但貼壁后的細(xì)胞不一定每個(gè)都能增殖和形成克隆。而形成克隆的細(xì)胞必為貼壁和有增殖活力的細(xì)胞。克隆形成率反映細(xì)胞群體依賴性和增殖能力兩個(gè)重要性狀。由于細(xì)胞生物學(xué)性狀不同，細(xì)胞克隆形成率差別也很大，一般初代培養(yǎng)細(xì)胞克隆形成率弱，傳代細(xì)胞系強(qiáng)；二倍體細(xì)胞克隆形成率弱，轉(zhuǎn)化細(xì)胞系強(qiáng)；正常細(xì)胞克隆形成率弱，腫瘤細(xì)胞強(qiáng)。并且克隆形成率與接種密度有一定關(guān)系，做克隆形成率測(cè)定時(shí)，接種細(xì)胞一定要分散成單細(xì)胞懸液，直接接種在碟皿中，持續(xù)一周，隨時(shí)檢查，到細(xì)胞形成克隆時(shí)終止培養(yǎng)。

服務(wù)周期：

1-2個(gè)月

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