樣本即用型試劑盒：含ATAC-seq實驗中除樣本以外的所有試劑，無需額外其他組分。

組織樣本需搭配12514/12516ES（組織細胞核提取試劑盒）。

植物樣本需自行處理成細胞核樣本后再搭配12208使用。

Hieff NGS® ATAC-Seq Library Prep Kit for Illumina®是針對Illumina®高通量測序平臺研發的用于ATAC-Seq實驗的文庫構建試劑盒，適用于100-100,000個細胞起始量的樣本建庫。ATAC-Seq(Assay for Transposase Accessible Chromatin with high-throughput sequencing)技術能夠利用Tn5 轉座酶識別染色質開放區域，快速有效的反映表觀遺傳狀態。經過細胞收集及裂解、轉座酶片段化、磁珠回收片段化DNA、文庫擴增和磁珠分選等步驟，DNA片段最終轉化為適用于Illumina®平臺測序的文庫。

本試劑盒包含兩個獨立模塊：BOX-I和BOX-II。BOX-I為提取DNA的DNA Extract Beads和回收文庫的DNA Clean Beads，BOX-II包含細胞裂解、片段化以及后續文庫擴增所需的所有試劑。此外，本試劑盒已在不同種類樣本(如K562、MCF-7細胞，小鼠肝臟等)中進行了驗證，均具有良好的建庫效率和建庫產量。本試劑盒提供的所有試劑都經過嚴格的質量控制和功能驗證，最大程度上保證了文庫的穩定性和重復性。

●含兩種純化磁珠：針對小片段純化，回收效果更好。

●實驗操作簡單、實驗周期短：建庫一步法，節省建庫時間；

●樣本投入量低，投入量兼容范圍廣：能兼容100~10萬個細胞投入。

●實驗重復性好

產品應用：ATAC-seq、染色質開放性研究、轉錄因子鑒定、足跡分析等

1、不同細胞投入量的ATAC建庫結果一致性較高

293細胞ATAC建庫，細胞投入量從100個到10萬個，不同細胞投入量建庫后，文庫峰型以及IGV可視化結果一致性較高。

2、凍存樣本ATAC建庫結果展示

對不同凍存時間的樣本進行ATAC建庫，目前測試凍存20天內的樣本建庫無問題，且測序結果信號明顯。

凍存樣本要求：盡量客戶樣本保存在液氮中，如果保存-80℃冰箱，需要無反復凍融情況。

BOX-I：2~8℃保存。

BOX-II：-25~-15℃保存。

Q：投入多少細胞量合適？

A：兼容100-100000個細胞或細胞核，最佳投入量為5w個細胞或細胞核。

Q：ATAC文庫產量低的原因？

A：1. 細胞核投入量少或實驗過程中細胞核部分丟失。細胞核離心后棄去上清液時容易造成丟失，在離心時，統一EP管方向并標記細胞沉積位置，棄上清時避免碰到沉淀，在實驗操作過程中避免劇烈渦旋振蕩；2. 轉座酶切割不充分，這種原因有很多，首選需要確認細胞核的純度，如果雜質較多，可能影響轉座酶的效果，提取細胞核時盡量多清洗幾遍，以獲得純凈的細胞核。

Q：TSS富集程度不好是什么原因？如何增加？

A：TSS富集效果不好通常是由于實驗樣本細胞活性不好或游離DNA較多。可對細胞或細胞核進行鏡檢確認細胞或細胞核完整性。

2、ATAC文庫中的線粒體reads較多，如何減少？

A：通常是由于細胞核提取過程中，細胞漂洗時未能吸出所有的上清液(其中包含mtDNA)。應吸盡上清，同時注意不要影響到細胞核完整性?；蛘呖梢远嗲逑磶妆?，提升細胞核的純度。